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堿性磷酸酶(ALP)-PAS 聯合染色試劑盒

時間:2013-6-25閱讀:715
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                            堿性磷酸酶(ALP)-PAS 聯合染色試劑盒說明書
產品簡介

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,簡稱ALP 或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于
哺乳動物組織內,其活性所需zui適pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞
膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和
毛細血管動脈部之內皮。此酶還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、
中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜及吞飲小泡。
糖原染色是病理學中常規的染色方法之一,McManus 在1946 年zui先使用高碘酸-雪
夫技術顯示黏蛋白,該法常用來顯示糖原和其他多糖。過碘酸(高碘酸)是一種強氧化劑,
它能氧化糖類及有關物質中的1,2-乙二醇基,使之變為二醛,醛與Schiff 試劑能結合成一
種品紅化合物,產生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細胞內其他物質,使用時應注意選擇好高
碘酸濃度和氧化時間,使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基,又不至于過氧化,這是很
關鍵的步驟。
ALP-PAS 聯合染色試劑盒不僅能夠顯示堿性磷酸酶活性位點和糖原等物質,
亦能區分二者。冰凍切片及石蠟切片均可。
產品組成:


操作步驟
1、石蠟切片脫蠟至雙蒸水。
2、冰凍切片在丙酮-氯仿等量混合液內固定(4℃) 2~5min。
3、切片入試劑(A),37℃,冰凍切片5~15min,石蠟切片2~12h。
編號
名稱 (6×50ml) (6×50ml) (6×50ml)
Storage
試劑(A): ALP 孵育液 50ml 100ml 500ml 4℃
試劑(B): 硝酸鈷溶液 50ml 100ml 500ml RT
試劑(C): 硫化胺溶液 50ml 100ml 500ml RT
試劑(D): 高碘酸水溶液 50ml 100ml 500ml 4℃
試劑(E): Schiff 液 50ml 100ml 500ml 4℃
試劑(F): 亞硫酸水溶液 50ml 100ml 500ml RT
試劑(G): 陰性對照 10ml 20ml 50ml 4℃
使用說明書 1 份
南京森貝伽生物科技有限公司

4、流水洗2min 后入雙蒸水。
5、入試劑(B),37℃,5min。
6、流水洗5min 后入雙蒸水。
7、入試劑(C)2min。
8、流水洗10min 后入雙蒸水。
9、試劑(D),室溫2~5min。
10、雙蒸水換洗3 次。
11、入試劑(E),37℃,10~30min。
12、試劑(F)水洗3 次,每次2min,入雙蒸水。
13、冰凍切片用明膠封片;石蠟切片脫水。
14、透明。
15、中性樹膠封片。
染色結果:堿性磷酸酶活性部位呈黑色,PAS 陽性物質呈紫紅色。
陰性對照:
1、切片經過陰性對照染色,結果陰性。
2、切片進入孵育液前,可先經碘、5%*溶液各3min,充分水洗后再進行孵育等
步驟。因碘有抑制酶反應作用,故可用此法作對照。
注意事項
1、適用于冰凍切片、石蠟切片。
2、染色過程中注意控制過碘酸處理的時間,否則容易褪色。
3、堿性磷酸酶顯色后,經高碘酸應特別小心,嚴格控制時間,否則褪色。
4、冷凍切片染色時間盡量要短。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6、使用場所應通風,并遠離火源。
儲存條件:試劑(A)、試劑(D) 、試劑(E) 、試劑(G)應置于4℃, 避光保存;其余應置于室溫;
6 個月有效。

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