蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本的使用說明書
實(shí)驗(yàn)原理
蛙或蟾蜍等兩棲類動(dòng)物的一些基本生命活動(dòng)和生理功能與溫血?jiǎng)游锵嗨疲潆x體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標(biāo)本可較長時(shí)間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標(biāo)本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過程以及骨骼肌收縮特點(diǎn)等。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
蛙類手術(shù)器械和藥品1套，包括：蛙板、小玻板各1塊，粗剪刀、直剪刀各1把，大鑷子、小鑷子各1把，*1把、探針1根、玻璃分針2根，大燒杯、小燒杯各1個(gè)，滴管1支，培養(yǎng)皿1個(gè)，棉線，任氏液，鋅銅叉。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持刺蛙針從枕骨大孔向前刺入顱腔，左右攪動(dòng)搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉(zhuǎn)向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時(shí)，蟾蜍后肢立即失去緊張性，多數(shù)情況出現(xiàn)尿失禁。若腦脊髓破壞*，可見蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。
2. 剪除上肢和內(nèi)臟：在骶髂關(guān)節(jié)上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側(cè)剪除所有內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及緊貼于脊柱兩側(cè)的坐骨神經(jīng)。
3. 剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經(jīng)），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝?nèi)ト亢笾つw，將標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。將手和用過的器械洗凈后再進(jìn)行以下步驟。
4. 分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側(cè)游離出兩條坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處各扎一細(xì)線，然后在扎線與脊柱之間剪斷神經(jīng)。提著神經(jīng)上的細(xì)線，將兩條坐骨神經(jīng)分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。捏著兩側(cè)髂骨向反方向分離，使恥骨聯(lián)合脫臼后，沿恥骨聯(lián)合正中將兩下肢剪開，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。
5. 游離坐骨神經(jīng)和剪斷股骨：認(rèn)清坐骨神經(jīng)溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周圍的結(jié)締組織，左手提著神經(jīng)上的細(xì)線，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝細(xì)心剝離，直至將坐骨神經(jīng)剝離到腘窩。將游離干凈的坐骨神經(jīng)放在下腿上，沿膝關(guān)節(jié)的周圍將大腿的所有肌腱剪斷，并用剪刀刮凈股骨下段附著的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱為坐骨神經(jīng)下腿標(biāo)本。
6. 游離腓腸肌：在坐骨神經(jīng)下腿標(biāo)本的基礎(chǔ)上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細(xì)線，左手提線，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關(guān)節(jié)。zui后用粗剪刀在膝關(guān)節(jié)下將小腿剪去，留下的即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本。做好的標(biāo)本用鋅銅叉的兩極輕輕接觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌立即收縮，表示標(biāo)本的興奮性良好，然后將標(biāo)本放入任氏液中，待其興奮性穩(wěn)定后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1. 已剝離皮膚的組織避免接觸皮膚毒液或其他不潔物。
2. 分離神經(jīng)時(shí)，一定要用玻璃分針，不能隨便用刀、剪進(jìn)行操作。
3. 不能過分牽拉神經(jīng)，以免造成損傷。
4. 標(biāo)本制備過程中應(yīng)適當(dāng)?shù)赜萌问弦簼駶櫂?biāo)本。
5. 避免用手指或金屬器械接觸或夾持標(biāo)本的神經(jīng)肌肉部分。
