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更新時(shí)間:2016-02-23 21:04:44瀏覽次數(shù):337次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室Z簡便Z常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室zui簡便zui常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等,但用的zui多的還是用纖維素(再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等)制成的透析膜,目前常用的是美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司spectrum和美國Union Carbide聯(lián)合碳化物公司(西安羅森伯公司主要代理以上2家公司透析袋)生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量,縮寫為MwCO)大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類,單位為道爾頓(D)。
商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為8 mm~77 mm不等。為防干裂,出廠時(shí)都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對(duì)蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。
1.將透析管剪成適當(dāng)長度(10-20cm)的小段,即成透析袋。
2.在大體積的2%(m/v)*和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。
3.將透析袋用蒸餾水*漂洗。
4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
5.透析袋冷卻后存放于4度,應(yīng)確保透析袋始終浸沒在液體中。
注:從此步起用透析袋時(shí)一定要戴手套操作。
6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。
注:也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水,松動(dòng)瓶蓋,于20psi(1.40kg/cm2)高壓滅菌10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,若長時(shí)間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口,用時(shí)必須仔細(xì)檢查,不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。
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