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常見問題:
一.沒有擴增產物
.循環溫度:變性溫度、退火溫度
2.引物設計
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA樣品
二.非特異產物及電泳呈涂布狀
.Mg2 濃度
2.調整引物、模板、聚合酶的用量
3.適當減少循環數
4.適當提高退火溫度,縮短退火或延伸時間?
產品名稱 | PCR擴增試劑盒 |
規格 | 48T/盒 |
分類 | PCR擴增試劑盒 |
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使用及效果:
PCR反應特點
() 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=0-2g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=0-6g)水平。能從00萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。?5-基-3(2H)-噠酮 54709-94-3 50gsu rhTFIIB 4℃保存
8-氧-3-氮雜二環[3.2.]辛烷 54745-74-3 00mg Poly r(A) -20℃保存
三氟甲烷鐿水合物 5476-04-5 250mg 本產品是雙鏈多聚脫氧核糖核苷,一條鏈是I,一條鏈是C,為凍干粉狀態,加水或TE緩沖液即可溶解,可用于誘導動物產生干擾素,還可以用于在EMSA中作為非特異性的競爭劑。 Poly(I).Poly(C)
2-氯4-甲氧基溴芐,95% 54788-7-9 500U Taq DNA Polymerase -20℃保存
硼三異丙酯 5479-55-6 5000U Taq DNA Polymerase -20℃保存
2,6-二甲氧基萘 5486-55-5 00U
-芐基-3-羥基氮雜環丁烷 5488-3-9 00U Hot Start Taq DNA Polymerase -20℃保存
4,5,6,7-四氫噻吩并[3.2-c]啶 54903-50-3 00U Blood-Direct Taq Polymerase -20℃保存
4-氯-7-氮雜吲哚 55052-28-3 500U Long-Taq DNA Polymerase -20℃保存
*內酯 5508-58-7 250U Tth DNA Polymerase -20℃保存
6-氨基青霉烷 55-6-6 250U
三(2-呋喃) 558-52-5 250U
2-氨基-5-基吡 552-58-4 00U Pfu DNA Polymerase -20℃保存
鄰基芐 552-45-4 00U
4-氯-3-氟苯甲 5527-95-7 250U Phusion DNA Polymerase -20℃保存
煌綠乳糖膽鹽肉湯 規格: 0.ml Rat Pentosidine
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯基礎 規格: 0.ml Rat intercellular adhesion molecule ,ICAM-
溴甲紫葡萄糖蛋白胨水培養基 規格: 0.2ml Rat intercellular adhesion molecule 2,ICAM-2
溴甲紫葡萄糖肉湯 規格: 0.ml Rat intercellular adhesion molecule 3,ICAM-3
胰蛋白胨大豆肉湯 規格: 0.ml Rat Cytochrome-C,Cyt-C
胰酪胨大豆瓊脂 規格: 0.ml Rat cytochrome P450,CYP450
胰胨大豆瓊脂斜面 規格: 0.ml Rat cytochrome P450 2E,CYP2E
堿性蛋白胨水 規格: 0.ml Rat Cyclin-D
孟加拉紅瓊脂 規格: 0.ml Rat Cyclin-D2
酵母粉葡萄糖氯素瓊脂 規格: 0.2ml Rat Cyclin-D3
Candida Elective 瓊脂 規格: mg Rat Fibronectin,FN
DTM培養基 規格: 0.ml Rat plasmin-antiplasmin complex,PAP
DRBC瓊脂 規格: 0.ml Rat plasminogen activator inhibitor,PAI
WORT瓊脂 規格: 0.ml Rat plasminogen activator inhibitor ,PAI-
WORT肉湯 規格: 0.2ml Rat Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI
特點:
. PCR擴增試劑盒即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
用途:
. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行PCR 實驗。
2. 快捷,操作步驟已經限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 本產品A 型含電泳染料,PCR 反應液可直接上樣電泳,進一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化,反應的靈敏度高,特異性強。能擴增各種常見的DNA 樣品。
5. 產物可直接用于T 載體克隆,不需要額外的加A 反應。
使用及效果:將本產品5 μL 與用戶自備的模板,引物和水共5 μL 混合后,直接進行PCR反(PCR 參數由用戶自己確定),反應結束后直接取0 μL 電泳檢查擴增結果。
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