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小鼠雪旺氏分離神經(jīng)組織；周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱(chēng)施萬(wàn)（schwann，又名雪旺細(xì)胞）細(xì)胞，它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬(wàn)細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上，這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無(wú)髓神經(jīng)纖維的施萬(wàn)細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異，施萬(wàn)細(xì)胞的外表面有基膜，能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生，參與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬(wàn)細(xì)胞的胞核呈長(zhǎng)卵圓形，其長(zhǎng)軸與軸突平行，核周有少量胞質(zhì)。由于施萬(wàn)細(xì)胞包在軸突的外面，故又稱(chēng)神經(jīng)膜細(xì)胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬(wàn)細(xì)胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱(chēng)神經(jīng)膜（neurilemma），光鏡下可見(jiàn)此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中，伴隨軸突一起生長(zhǎng)的施萬(wàn)細(xì)胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內(nèi)，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長(zhǎng)并反復(fù)包卷軸突，把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結(jié)處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬(wàn)細(xì)胞的胞膜，屬施萬(wàn)細(xì)胞的一部分。施萬(wàn)細(xì)胞的胞質(zhì)除見(jiàn)于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外，還見(jiàn)于髓鞘板層內(nèi)的施－蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道，并與細(xì)胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。
方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠雪旺氏采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠雪旺氏經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhǔn)備工作

1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無(wú)菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。

2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購(gòu)買(mǎi)合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無(wú)菌且在有效期內(nèi)。

3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來(lái)源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫(kù)中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無(wú)菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對(duì)組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。

2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無(wú)菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。

細(xì)胞分離

1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。

2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。

3. 過(guò)濾與離心：用細(xì)胞篩過(guò)濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。

細(xì)胞觀察與檢測(cè)

1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè)：在需要時(shí)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)，以了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和健康狀態(tài)。

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫或非營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。

- 使用無(wú)菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。

2. 消化酶選擇

- 根據(jù)組織類(lèi)型選擇消化酶，避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。

- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。

二、培養(yǎng)條件優(yōu)化

1. 培養(yǎng)基選擇

- 使用含血清或特定生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴(lài)氨酸）。

- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過(guò)度匯合會(huì)導(dǎo)致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無(wú)菌操作

- 全程在超凈臺(tái)操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞活性。

2. 支原體檢測(cè)

- 定期檢測(cè)支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。

四、狀態(tài)監(jiān)控

1. 日常觀察

- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。

- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營(yíng)養(yǎng)不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。