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小鼠粘蛋白/粘液素5AC檢測(cè) MUC5AC ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2021-12-28 17:07:42瀏覽次數(shù):408次

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小鼠粘蛋白/粘液素5AC檢測(cè)  MUC5AC ELISA試劑盒  使用說(shuō)明書(shū)elisa法測(cè)定
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 操作步驟 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的小鼠粘蛋白/粘液素5AC檢測(cè)  MUC5AC ELISA試劑盒 檢測(cè)范圍。 

加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品00μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)20分鐘。 

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 00μl(取μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。 

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡-2分鐘,200μl/每孔,甩干。  

4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同標(biāo)記抗體工作液) 00μl37℃60分鐘。 

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡-2分鐘,200μl/每孔,甩干。 

6. 依序每孔加底物溶液90μl37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。 

7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。 

 

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