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上海江萊生物科技有限公司

雞免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析elisa試劑盒使用說明書

時間:2013-4-7閱讀:418
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 上海江萊生物科技有限公司擁有高品質的國內生命科學,具有種類多、質量好、價格低等優點。質量被全國各大院校科研機構認可,并為Elisa試劑盒長期供應商,作為戰略合作伙伴。歡迎您訂購!

 
免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析elisa試劑盒使用說明書

 

 
 
 
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中雞免疫球蛋白A(IgA)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白A(IgA),再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白A(IgA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞免疫球蛋白A(IgA)濃度。
 
免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析elisa試劑盒組成
試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1個
1個
 
酶標包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
標準品:27 μg/ml
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶標試劑
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
樣品稀釋液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
濃縮洗滌液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8℃保存
 
免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析elisa試劑盒操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為18μg/ml,12μg/ml ,6μg/ml,3μg/ml, 1.5μg/ml)。

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 
檢測范圍:                                             

1μg/ml -25μg/ml                                      

                           
 

 

需要而未提供的試劑和器材

 

1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
 

免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析elisa試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R 值,大于等于
0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 mg/L。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6 個月

 
 

 

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