中英文名稱:偽狂犬病毒gE2.0抗體診斷試劑盒;Pseudorabies virus gE2.0 antibody diagnostic kit.產(chǎn)品性狀:試劑（瓶裝）
科研范疇:elisa試劑盒系列
產(chǎn)品用途:供科研單位,各大高校等用于科研實(shí)驗(yàn).
產(chǎn)品儲(chǔ)存:2-8°C
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
使用注意事項(xiàng):試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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偽狂犬病毒gE2.0抗體診斷試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)PCR-SSP分析實(shí)驗(yàn)原理和步驟PCR 序列特異性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能夠特異識(shí)別特定等位基因的引物通過PCR 擴(kuò)增檢測(cè)序列多態(tài)性的方法，也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用PCR-SSP 法檢測(cè)MN 基因型。[實(shí)驗(yàn)原理]根據(jù)決定某等位基因的堿基性質(zhì)，設(shè)計(jì)3´端*個(gè)堿基分別與各等位基因的特異性堿基相匹配的序列特異性引物，在PCR 反應(yīng)過程中，只有引物3´端*個(gè)堿基與決定特定等位基因的堿基互補(bǔ)時(shí)才能實(shí)現(xiàn)DNA 片段的*復(fù)制，根據(jù)PCR 產(chǎn)物的有無進(jìn)行等位基因的分型。
[實(shí)驗(yàn)方法]1.PCR 擴(kuò)增 PCR 反應(yīng)體系為20μl（2 個(gè)體系，分別為引物1 和引物2），含模板2μl（約50ng），引物各1.5μl，dNTP1.6μl（0.4mM），10×Buffer 緩沖液2μl，Taq 酶1.0U，加雙蒸水至20.0μl；PCR 反應(yīng)條件為94℃4min，94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min，30 個(gè)循環(huán)。2.PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè) 取PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物2μl，6%聚丙烯酰胺凝膠電泳（T=6%，C=3.3%，凝膠規(guī)格為82mm×64mm×0.75mm）。電極緩沖液為1×TBE。將加有1/5 體積上樣緩沖液的酶切產(chǎn)物電泳，220 v 電壓，電泳2－3h。銀染顯色[結(jié)果判定]根據(jù)電泳譜帶的有無判定等位基因型別，僅有1 個(gè)體系檢測(cè)到譜帶者為相應(yīng)特異性引物對(duì)應(yīng)型（M 或N），2 個(gè)體系均檢測(cè)到譜帶者為MN 型。[實(shí)驗(yàn)討論]1.注意事項(xiàng) ①如引物結(jié)合序列存在堿基變異可能無擴(kuò)增產(chǎn)物，導(dǎo)致錯(cuò)誤判型；②在對(duì)照樣品分型準(zhǔn)確的基礎(chǔ)上才能判定結(jié)果。2.方法評(píng)價(jià) 該方法操作簡(jiǎn)單，引物設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)的復(fù)性條件要求較高。
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