中英文名稱:雞巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒;Chicken alternative macrophage activation-associated factor 1 (AmAC-1) ELISA Kit產品性狀:試劑(瓶裝)
科研范疇:elisa試劑盒系列
產品用途:供科研單位,各大高校等用于科研實驗.
產品儲存:2-8°C
產品規格:48T/96T
使用注意事項:試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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雞巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒實驗時PCR-SSP分析實驗原理和步驟PCR 序列特異性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能夠特異識別特定等位基因的引物通過PCR 擴增檢測序列多態性的方法,也稱作等位基因特異性引物PCR 法。本實驗是應用PCR-SSP 法檢測MN 基因型。[實驗原理]根據決定某等位基因的堿基性質,設計3´端*個堿基分別與各等位基因的特異性堿基相匹配的序列特異性引物,在PCR 反應過程中,只有引物3´端*個堿基與決定特定等位基因的堿基互補時才能實現DNA 片段的*復制,根據PCR 產物的有無進行等位基因的分型。
[實驗方法]1.PCR 擴增 PCR 反應體系為20μl(2 個體系,分別為引物1 和引物2),含模板2μl(約50ng),引物各1.5μl,dNTP1.6μl(0.4mM),10×Buffer 緩沖液2μl,Taq 酶1.0U,加雙蒸水至20.0μl;PCR 反應條件為94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min,30 個循環。2.PCR 擴增產物的檢測 取PCR 擴增產物2μl,6%聚丙烯酰胺凝膠電泳(T=6%,C=3.3%,凝膠規格為82mm×64mm×0.75mm)。電極緩沖液為1×TBE。將加有1/5 體積上樣緩沖液的酶切產物電泳,220 v 電壓,電泳2-3h。銀染顯色[結果判定]根據電泳譜帶的有無判定等位基因型別,僅有1 個體系檢測到譜帶者為相應特異性引物對應型(M 或N),2 個體系均檢測到譜帶者為MN 型。[實驗討論]1.注意事項 ①如引物結合序列存在堿基變異可能無擴增產物,導致錯誤判型;②在對照樣品分型準確的基礎上才能判定結果。2.方法評價 該方法操作簡單,引物設計與實驗的復性條件要求較高。
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