人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒(elisa kit)
中文簡稱:人熱休克蛋白糖蛋白96ELISA試劑盒 英文簡稱:(HSP gp96)ELISA KIT
ELISA簡介 內(nèi)容目錄導航:ELISA簡介 ELISA試劑組成 ELISA測定步驟 ELISA試劑展示
人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒(elisa kit)敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷試劑盒。且擁有試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等特點。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。ELISA常用方法:雙抗體夾心法測定。規(guī)格:96T/48T。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%。保存條件及有效期:試劑盒保存:2-8℃,有效期:6個月。
ELISA試劑組成
1.抗原 在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類,即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。
2.抗體 在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)。多抗取白免疫動物的抗血清,制備較簡單,但抗血清成分復雜,除含針對抗原(多個表位)的抗體外,還含有多種其他抗體,親和力和特異性相對要低于單抗,且制備周期長,批間差異較大。
3.酶和底物 在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP
(1)HRP:是一種糖蛋白,含糖量約18%,分子量為44kD,在蔬菜作物辣根中含量很高。(2)ALP:是一種磷酸酯的水解酶,用做示蹤酶的ALP活性應(yīng)在l 000U/mg以上。
4.固相載體 固相載體是ELISA中用以分離結(jié)合標記物和游離標記物的主要手段,應(yīng)與各種免疫活性物質(zhì)有良好的結(jié)合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜。
5.包被 將免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)結(jié)合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等;常用的方法有吸附法、化學交聯(lián)法及親和素-*間接包被法。
ELISA測定步驟
人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒(elisa kit)測定時一般需經(jīng)過以下步驟:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。ELISA操作較繁雜,操作不當將引起較大的誤差。在操作中應(yīng)注意以下5個方面。
1.隨著病情的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,因此有必要對標本進行預(yù)處理,例如對血清標本作適當稀釋,或離心分離血脂等。間接法測定中,標本適當稀釋還可降低非特異性反應(yīng)。
2.加樣一般使用加液器,在ELISA中一般有4次加樣:加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手工檢測中,還應(yīng)注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不*,對競爭法及定量檢測影響很大,不注意可能會導致錯誤結(jié)果或定量不準。
4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物,終止抗原抗體反應(yīng),除去標本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機洗板或手工洗板,前者洗滌質(zhì)量較好,各反應(yīng)孔洗滌效果均一,批內(nèi)、批間差異小,手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果,差異不宜太大。
5.準確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀(酶標儀),比色法判讀可選擇單波長或雙波長,根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值(A值)。酶標儀具有良好的重復性。
ELISA試劑展示
人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒(elisa kit)
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