吖啶橙（AO）-EB 雙染色試劑盒說明書
原理及作用：
　　　細胞凋亡的檢測方法有形態學研究方法，生物化學研究方法，DNA 片段化檢測方法，以 及 TUNEL 等標記片段化 DNA 方法，但從細胞凋亡概念產生的歷史及準確性方面考慮，使用光 學顯微鏡及電子顯微鏡進行的形態學觀察是很重要的。
　　　細胞死亡的檢測方法有用熒光色素染色區分活細胞、死細胞，測定細胞代謝活性和形態 學觀察。這些方法都是利用細胞凋亡這種情況進行測定的，因而不一定反映實際情況。MTT 法是測定線粒體中*酶的活性，反映細胞數目的變化，其結果與細胞死亡的數目未必一致。 所以，有必要采用多種方法判斷細胞凋亡。
　　　吖啶橙嵌合到雙鏈 DNA 分子中顯綠色，與 DNA 單鏈或 RNA 結合時發橙色熒光。EB 嵌合 到 DNA 堿基對中間時發紅色熒光。吖啶橙可透過活細胞膜，EB 不能通過與活細胞膜具有相 同通透性的細胞膜。
試劑：100ug/ml 的吖啶橙溶液（PBS 溶解），100ug/ml 的 EB 溶液（PBS 溶解）。

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試劑盒組成

參考操作步驟

1、 每份樣品中加入試劑（A）及試劑（B）各 1ul，混合均勻；

2、 500g 離心細胞 5min；

3、 用 PBS 重懸細胞，將細胞密度調整為 5x105-5x106/ml；

4、 每 25ul 細胞懸液中加入試劑（A）和試劑（B）混合液；

5、 在潔凈的載玻片上加上 5ul 細胞懸液，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡 B 域進行觀察；

6、 顯綠色熒光的為活細胞，顯橙色熒光的為死細胞。

貯存

4℃,避光,4 個月

 注意事項

用能通過活細胞膜與 DNA 結合后發藍色熒光的 Hoechist 33342 和只能通過死細胞與 DNA 結合后發紅色熒光的碘化吡啶（ propidium iodide，PI）對細胞進行二重染色的方法也比較 常用。