本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于檢測飼料和谷物中AFB1含量。
（AFB1）實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法，在微孔板包被有AFB1偶聯抗原，加入AFB1標準品或樣品，游離AFB1與微孔條上預包被的AFB1偶聯抗原互相競爭抗AFB1抗體酶標記物，用TMB底物顯色，加入終止
液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測，吸光值與樣品中AFB1含量成反比，通過標準曲線計算樣品中AFB1的含量。
3 試劑盒組成
3. 1 預包被的 AFB1偶聯抗原的可拆酶標板：1 塊（12 孔×8條）。
3. 2 AFB1標準品：6 瓶（1ml/ 瓶），含量分別是： 0 ng/ml ，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7
ng/ml,8.1 ng/ml。
3. 3 抗AFB1抗體酶結合物：1 瓶（6ml ）。
3. 4 顯色液 A：1 瓶（6ml ）。
3. 5 顯色液 B ：1 瓶（6ml ）。
3. 6 終止液：1 瓶（6ml ），2M 硫酸。
3. 7 *：1 瓶（10 × , 6 ml），用于樣品稀釋用。
3. 8 濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20 ml），用于洗板。
3. 9 說明書一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 設備
4.1.1波長450nm 酶標儀。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
（AFB1）貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8 ℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒。
2
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4 標準品中含有AFB1，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
實驗結果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的*，否則會影響實驗結果
6.9 混合試劑時應避免起泡。
7 工作液準備
7.1 AFB1 標準品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1: 20（1+ 19） 稀釋備用
7.3 *：備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應終止液：已備用
（AFB1）樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則
會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70% 甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25 µl 處理后的樣品，加入25µl *于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8 ℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8 ℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預*行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8 ℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10× ）、濃縮洗滌液（10× ）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml 標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50µl 的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl 樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl 的抗AFB1抗體酶結合物
9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。
