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人可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1ELISA試劑盒

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更新時間:2017-04-14 18:41:37瀏覽次數(shù):398次

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“人可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1ELISA試劑盒"保存:1.試劑盒保存:;2-8℃。
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人可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1ELISA試劑盒組成:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

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說明書

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1個

1個

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

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顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

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顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

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終止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

30ml×1瓶

2-8℃保存

中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。

(3)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是雙氧水在臨用前加入。

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