正常小梁細胞原代培養
實驗材料:
1. 材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml*、100μg/ml*,pH7.2;
3. 器械:*與無齒鑷等;
4. 消毒液:200IU/ml的*生理鹽水;
5. 培養液:基礎液由DMEM培養基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-*0.06 g/L配制而成。應用液是在基礎液內補加15%的胎牛血清、*100IU/ml、*100μg/ml,并用5% NaHCO3調節pH至7.0—7.2;
6. 培養器皿:培養瓶、24孔培養板或培養皿若干;
實驗方法:
1. 將離體的供體眼球用200IU/ml的*溶液浸泡消毒5min;
2. 無菌條件下,沿角膜緣后5mm處環形剪開眼球,剪斷晶狀體懸韌帶,去除晶狀體和玻璃體;
3. 將眼前段倒放在培養皿中,在顯微鏡下用無齒鑷把虹膜抹離角膜內皮面,暴露房角結構。用*緊貼虹膜與鞏膜的附著部位,剪除色素膜;
4. 以PBS溶液或*輕微沖洗小梁組織表面。用*伸入Schlemm管,楔形剪取小梁組織。前界至Schwalbe線,后界至鞏膜嵴。環形取出一塊小梁組織,置于培養皿中;
5. 經PBS漂洗后將小梁*碎,幾乎成漿狀;
6. 用無齒鑷挑起少許小梁組織,接種于24孔培養板后培養瓶皿中,輕輕鋪平。待組織稍干后加入適量培養液,在CO2培養箱靜置培養。第四天后開始換液,每周2次;