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技術文章
正常滑膜細胞原代培養
點擊次數：1087 發布時間：2012-11-29
正常滑膜細胞原代培養
實驗材料：
1. 實驗動物：大鼠、兔，人手術切除的關節等；
2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg 2+ 的1×PBS，添加100IU/ml*、100μg/ml*，pH7.2；
3. 培養液：RPMI1640培養基，補加15%小牛血清；
實驗方法：
1. 將大鼠處死后，用75%酒精消毒；
2. 用*剖開其四肢皮膚與肌肉，暴露長骨兩端的關節，取出關節面滑膜組織置于盛有緩沖液的培養皿中；
3. 剔除滑膜組織外層結構及周邊軟骨組織，用緩沖液洗2—3次；
4. 將滑膜組織置于盛有少量小牛血清的培養皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植塊；
5. 將制備的植塊接種到螺旋口培養瓶中。反轉培養瓶，使植有組織塊的一面朝上，加入培養液，蓋好瓶蓋。將培養瓶放入含5%CO2的培養箱中在37℃條件下進行培養；
6. 培養4h后，組織塊較牢黏附于瓶底時，再輕輕反轉培養瓶，繼續培養；
7. 培養3d后換培養液。