一、動物細胞生長特性及培養溫度
1.細胞生長緩慢,易污染,培養需用抗生素
2.細胞大,無細胞壁,機械強度低,環境適應性差
3.需氧少,不耐受強力通風與攪拌
4.群體生應,貼壁生長(錨地依賴性)
5.培養過程產品分布細胞內外,成本高
6.原代培養細胞一般繁殖50代即退化死亡
依據在體外培養時對生長基質依賴性差異,動物細胞可分為兩類:
●貼壁依賴型細胞:需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長,大多數動物細胞,包括非淋巴組織細胞和許多異倍體細胞均屬于這一類。
●非貼壁依賴型細胞:無需附著于固相表面即可生長,包括血液、淋巴組織細胞、許多腫瘤細胞及某些轉化細胞。
培養細胞的zui適溫度相當于各種細胞或組織取材機體的正常溫度。人和哺乳動物細胞培養的zui適溫度為35~37℃。偏離這一溫度,細胞正常的代謝和生長將會受到影響,甚至死亡。總的來說,培養細胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時,細胞代謝強度與溫度成正比;細胞培養置于39~40℃環境中1h,即受到一定損傷,但仍能恢復;當溫度達43℃以上時,許多細胞將死亡。當溫度下降到30~20℃時,細胞代謝降低,因而與培養基之間物質交換減少。首先看到的是細胞形態學的改變以及細胞從基質上脫落下來。當培養物恢復到初始的培養溫度時,它們原有的形態和代謝也隨之恢復到原有水平。
二、貼壁培養(attachment culture)是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養。
1.生長特性:貼壁依賴型細胞在培養時要貼附于培養(瓶)器皿壁上,細胞一經貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進入對數生。一般數天后就鋪滿培養表面,并形成致密的細胞單層。
2.貼壁培養的優點:
●容易更換培養液;細胞緊密黏附于固相表面,可直接傾去舊培養液,清洗后直接加入新培養液。
●容易采用灌注培養,從而達到提高細胞密度的目的;因細胞固定表面,不需過濾系統。
●當細胞貼壁于生長基質時,很多細胞將更有效的表達一種產品。
●同一設備可采用不同的培養液/細胞的比例。
●適用于所有類型細胞。
3.貼壁培養的缺點:與懸浮培養法相比
●擴大培養比較困難,投資大;
●占地面積大;
●不能有效監測細胞的生長;