蛋白質(zhì)的定量分析是生物化學和其它生命學科zui常涉及的分析內(nèi)容，是臨床上診斷疾病及檢查康復情況的重要指標，也是許多生物制品，藥物、食品質(zhì)量檢測的重要指標。在生化實驗中，對樣品中的蛋白質(zhì)進行準確可靠的定量分析，則是經(jīng)常進行的一項非常重要的工作。
蛋白質(zhì)是一種十分重要的生物大分子：它的種類很多，結(jié)構(gòu)不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法代來了許多具體的困難。目前測定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種，下面列出根據(jù)蛋白質(zhì)不同性質(zhì)建立的一些蛋白質(zhì)測定方法：
物理性質(zhì)：紫外分光光度法
化學性質(zhì)：凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法，BCA法，膠體金法
染色性質(zhì)：考馬氏亮藍染色法、銀染法
其他性質(zhì)：熒光法
蛋白質(zhì)測定的方法很多，但每種方法都有其特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎上根據(jù)不同情況選用恰當?shù)姆椒ǎ詽M足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果zui，但操作復雜，用于大批量樣品的測試則不太合格；雙縮脲法操作簡單，線性關系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應用受到限制；而酚試劑法彌補了它的缺點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素多；考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而又簡便開始重新受到關注；BCA法又以其試劑穩(wěn)定，抗力較強，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎；膠體金法具有較高的靈敏度，可達到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。
常用的測定蛋白質(zhì)含量方法的比較
方 法
測定范圍
（μg/ml）
不同種類
蛋白的差異
zui大吸收
波長（nm）
特 點
凱氏定氮法
小
標準方法，準確，操作麻煩，費時，靈敏度低，適用于標準的測定
紫外分光光度法
100—1000
大
280
205
靈敏，快速，不消耗樣品，核酸類物質(zhì)有影響
雙縮脲法
1000—10000
小
540
重復性、線性關系好，靈敏度低，測定范圍窄，樣品需要量大
Folin-酚試劑法
20—500
大
750
靈敏，費時較長，干擾物質(zhì)多
考馬氏亮藍G-250
50—500
大
595
靈敏度高，穩(wěn)定，誤差較大，顏色會轉(zhuǎn)移
BCA
50—500
大
562
靈敏度高，穩(wěn)定，干擾因素少，費時較長 由于凱氏定氮法的操作作過于復雜，雙縮脲法的靈敏度又太低，下面介紹Folin—酚試劑法，考馬氏亮藍G—250染色法，紫外分光光度法、膠體金法等幾種zui常用使用的方法。
一、Folin－酚試劑法（又名Lowry）法
目前實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量，此法的特點是靈敏度高，較雙縮脲高兩個數(shù)量級，較紫外法略高，操作稍微麻煩，反應約在15分鐘有zui大顯色，并zui少可穩(wěn)定幾個小時，其不足之處是干擾因素較多，有較多種類的物質(zhì)都會影響測定結(jié)果的準確性。
【原 理】
蛋白質(zhì)中含有酚基的，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產(chǎn)生蘭色化合物，顏色深淺與蛋白含量成正比。
【操 作】
1、標準曲線的制備：
按下表操作，在試管中分別加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml蛋白標準溶液，用生理鹽水補足到1ml。加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后，再加入0.5ml酚試劑混勻。
編 號 1 2 3 4 5 6 蛋白標準（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 混勻后室溫（25℃）放置20分鐘 酚試劑（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鐘后，以第1管為空白，在650nm波長比色，讀出吸光度，以各客的標準蛋白濃度為橫坐標，以其吸光度為縱坐標繪出標準曲線。
2、血清蛋白質(zhì)測定。
稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）：準確吸取0.1ml血清，置于50ml容量瓶中，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。再取三只試管，分別標以1、2、3號，按下表操作：
編 號 測定管 標準管 空白管 稀釋標本（ml） 0.2 — — 稀釋標準液（ml） — 0.2 — 0.9%NaCl（ml） — — 0.2 堿性酮液（ml） 1.0 1.0 1.0 混勻后于室溫放置20分鐘 酚試劑（ml） 0.1 0.1 0.1
混勻各管，30分鐘后，在波長650nm比色，讀取吸光度。
【計 算】
1、以測定管讀數(shù)查找標準曲線求得血清蛋白含量。
2、無標準曲線時，可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量：
