將出生2天以內(nèi)的新生SD大白鼠10只,用75%的酒精浸泡消毒后,采用無菌方法迅速取出大腦,用冷的D-Hanks液清洗并剔除腦膜和血管,取大腦皮質(zhì),將碎為1mm3,用0.125%,37ºC消化10分鐘,過濾(200目尼龍濾網(wǎng)),離心(1000rpm 10分鐘)。
去上清,加入DMEM/F12*培養(yǎng)基(其中含10%胎牛血清,10%馬血清,L-2mmol/L,100u/ml,100μg/ml)制成細(xì)胞懸液。
計數(shù)后按5×105/cm2接種于培養(yǎng)瓶。貼附30min后,轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液至新瓶中,加入DMEM/F12*培養(yǎng)基,在37ºC, 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9天(每3天更換培養(yǎng)液一次),第9天將培養(yǎng)瓶置于恒溫旋轉(zhuǎn)搖床上37ºC, 240rpm,搖18小時,去掉懸浮的細(xì)胞,用D-Hanks液清洗3次,進(jìn)行傳代培養(yǎng)即得純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。
經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測,98%以上的細(xì)胞GFAP免疫反應(yīng)為陽性。