馬伊氏錐蟲酶聯免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：馬伊氏錐蟲酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于定性測定馬血清，血漿及相關液體樣本中伊氏錐蟲。

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標本中馬伊氏錐蟲。用純化的伊氏錐蟲抗體包被微孔板，制成固相抗體，與樣品中伊氏錐蟲溫育后，加入標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中馬伊氏錐蟲的存在與否。

試劑盒組成

標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

1.         編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照（不加樣品，標記的抗-IgG抗體，鏈霉親和素-HRP，其余操作相同）1孔

2.         加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，37℃溫育45分鐘。

3.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。

5.         加標記的抗-IgG抗體：每孔加入標記的抗-IgG抗體50μl（空白孔除外）。37℃溫育30分鐘

6.         洗滌：操作同4。

7.         加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP（空白孔除外），輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

8.         洗滌：操作同4。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定：

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為馬伊氏錐蟲陰性

  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為馬伊氏錐蟲陽性

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

規格：

96人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。