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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

單向免疫擴(kuò)散法(Single radil immunodiffusion)—正常人群IgG正常值檢

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【原理】
在含有特異抗體的瓊脂板中打孔,并在孔中加入定量的抗原,當(dāng)抗原向周圍擴(kuò)散后與瓊脂中抗體相結(jié)合,既形成白色沉淀環(huán),其直徑或面積與抗原濃度呈正相關(guān)。同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)抗原或參考蛋白制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可用以定量檢測未知標(biāo)本的抗原濃度(mg/ml或IU/ml)。
應(yīng)用這一實(shí)驗(yàn)方法可檢測正常人群或患者血清中IgG、IgA及IgM的含量及正常值。
【材料】
1.示教部分:
2%離子瓊脂或生理鹽水瓊脂(內(nèi)含2‰NaN3)
標(biāo)準(zhǔn)馬抗人IgG血清(抗體)(北京生物制品研究所生產(chǎn))
參考蛋白工作標(biāo)準(zhǔn)(北京生物制品研究所生產(chǎn))
pH7.2 PBS
玻璃板或載玻片。
打孔器(孔徑3mm)及打孔模板。
微量加樣器
濕盒(容器內(nèi)加濕紗布或泡沫塑料)
2.實(shí)驗(yàn)部分:
已制備好的含有馬抗人IgG抗體的1%瓊脂板。
1:50稀釋的單人份待檢血清標(biāo)本。
打孔器、模板、微量加樣器及濕盒等。
【方法】
(一)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:示教
1.按照玻片的大小,以能制做1~1.5mm厚度的瓊脂板的量,分裝其1/2量的2%鹽水瓊脂。例如,用普通載玻片制做時(shí)其1%瓊脂量為4ml,在分裝2%鹽水瓊脂時(shí)既為2ml。溶化后置56~60℃水浴中平衡溫度備用。
2.稀釋抗體:將標(biāo)準(zhǔn)抗人IgG抗體按其效價(jià)用pH7.2 PBS做成1倍稀釋。例如,血清效價(jià)為1:140,原濃血清既應(yīng)稀釋為1:70。并分裝試管,其分裝量應(yīng)與2%鹽水瓊脂量相等。
3.制板:將已稀釋的抗人IgG抗體于56℃水浴中預(yù)熱約半分鐘,再傾注于已溶化并維持56~60℃的2%鹽水瓊脂管中,用拇指將管口堵緊。翻轉(zhuǎn)試管1~2次,將抗體與瓊脂混合均勻(注意:抗體與瓊脂混合時(shí)切勿產(chǎn)生氣泡),迅速傾注于玻片上,待凝固后既制成。
4.打孔:將瓊脂板置于模板上,在同一直線上用打孔器打孔5個(gè),孔距10mm。
5.稀釋不同濃度的參考蛋白標(biāo)準(zhǔn)(工作標(biāo)準(zhǔn)):應(yīng)根據(jù)制品說明進(jìn)行稀釋,例如:工作標(biāo)準(zhǔn)中免疫球蛋白含量,IgG為100單位/ml,80.4微克/單位,其稀釋范圍為1:10、1:20、1:40、1:80及1:160。
6.加樣:將已稀釋的不同濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)順序用微量加樣器每孔加入10μl(注意:每一稀釋度均應(yīng)更換塑料吸頭)。
7.置濕盒中,放37℃溫箱,24小時(shí)后觀察結(jié)果。
8.用量角規(guī)測量并記錄沉淀環(huán)直徑,然后以沉淀環(huán)直徑為縱座標(biāo),不同單位/ml為橫座標(biāo),繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在制做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),為盡量減少誤差,至少應(yīng)做兩份以上標(biāo)準(zhǔn)板。
(二)正常人血清中IgG值的測定:
1.將已制備好的抗體瓊脂板置打孔模板上,每一瓊脂板可打孔4個(gè)(孔徑3mm,孔距10mm)。
2.將單份正常人血清用pH7.2 PBS分別作1:50稀釋。
3.用微量加樣器分別取1:50稀釋的單人份血清標(biāo)本10μl加入孔中,每份標(biāo)本應(yīng)各加兩孔(每份標(biāo)本均應(yīng)更換塑料吸頭)。
4.作好標(biāo)記置濕盒中,放37℃溫箱,24小時(shí)后觀察結(jié)果。
【結(jié)果】
測量各份標(biāo)本的沉淀環(huán)直徑并記錄結(jié)果,然后用標(biāo)準(zhǔn)曲線測出每份標(biāo)本所含IgG的單位/ml,并換算為mg/ml。
將全班實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出統(tǒng)計(jì)及均值,并寫出較完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

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