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上海士鋒生物科技有限公司
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培養基
培養基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標準血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養基 即用型液體培養基 一次性培養基平板 顯色培養基 臨床培養基 菌種保存培養基 四環素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養基 維生素檢測培養基 一次性衛生用品衛生檢測培養基 罐頭食品商業無菌檢測培養基 飲用水及水源檢測培養基 藥品、生物制品檢測培養基 化妝品檢測培養基 動物細胞培養基 啤酒檢驗培養基 軍團菌檢測培養基 支原體檢測培養基 小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗培養基 彎曲桿菌檢驗培養基 產氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養基 阪崎腸桿菌檢驗培養基 溶血性鏈球菌檢測培養基 李斯特氏菌檢測培養基 弧菌檢測培養基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養基 酵母、霉菌檢測培養基 檢測培養基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養基 細菌總數檢測,增菌培養基
抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
試劑盒

士鋒生物轉化步電穿孔法進行質體實驗

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儀器用具:

37℃培養箱及冰浴

Electroporation cuvette (electrode gap, 0.1 cm)

Electroporator (Bio-Rad, IBI geneZapper 或其它廠牌)

藥品試劑:

無菌水 (置冰浴中)

10% glycerol (置冰浴中)

SOB 液體培養基

SOB 固體培養基

SOC 液體培養基

SOC/Amp 固體培養基

大腸桿菌JM109

Ligation mixtures

方法步驟:

菌體的處理:

1) 進行轉形實驗的前16~20 h,將菌種JM109 接種在SOB 固體培養基上,并在37℃培養箱中培養。

34 Methods in Biotechnology Vol 1

2) 取80 mL SOB培養基裝入250 mL滅過菌的三角瓶。 另取1 mL SOB加于微量離心管中。由SOB固體培養基上選8 個約2~3 mm大小的單一菌落接入1mL SOB中,震蕩將菌體打散后,加入80 mL SOB中,于37℃震蕩培養約2~3h,直至細胞數約為4~7×107/mL.

3) 收集菌液于離心管中,置冰浴中10 min.

4) 以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。

5) 倒去上清,并盡量將液體倒干,或以微量移液器頭吸干凈。

6) 沉淀加入80 mL 冰冷的無菌水,稍加震蕩,混合均勻后以750~1,000 g 離心12~15 min (4℃)。

7) 倒去上清,菌體再依序以40 mL 及1.6 mL 無菌水同法處理。

8) 菌體以0.16 mL 冰冷的10% glycerol 懸濁。

9) 菌液每80 μL分裝一管,可直接用于electroporation,或以液態氮或干冰快速凍結后置 -70℃貯存。

Electroporation:

1) 進行electroporation 的DNA 樣品溶液中離子強度不可過高,DNA 需先經過透析或以酒精沉淀處理。透析可如2.3.1 節步驟15) 進行。

2) Cuvettes 自包裝中取出后,置冰浴中至少5 min.

3) 將菌液置于冰浴中,加入DNA 樣品,混合后,小心將溶液吸至cuvette 的凹槽中,將cuvette 置冰浴中。

4) 進行electroporation 時,將cuvette 由冰浴中取出,將四周水份擦干,置于反應槽中,并接上電極線。

5) 以2.5 kV, 21 μF 進行electroporation.

◆ 注意!高電壓!

6) 取出cuvette,立即加入1 mL SOC.

7) 吸出菌液移至微量離心管中,于37℃震蕩培養45 min.

8) 取200 μL 菌液涂布于SOC/Amp plate.置37℃培養16~20 h.

9) 觀察plate 上菌落的形狀并計算菌落數。
 

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