本文的主要目的是掌握F-4600熒光分光光度計的正確的操作方法，確保儀器的正常運作。此外也列舉了一些熒光分光光度計使用中的注意事項。

1.目的：規范F-4600熒光分光光度計的使用，保證儀器的正常運行。

2.范圍：適用于F-4600熒光分光光度計

3.職責：質量管理部檢驗中心、研發部化驗員負責本規程的執行。

質量管理部、研發部負責人負責本規程實施情況的監督檢查。

4.內容：

4.1 儀器組成

熒光分光光度計，熒光池，配套系統，計算機，打印機。

4.2原理

某些物質受紫外光或可見光照射激發后能發射出比激發光較長的熒光，物質的激發光譜和熒光發射光譜，可以做該物質的定性分析。

4.3操作步驟

4.3.1打開光度計左側的電源開關，儀器前方右側的運行指示燈和氙燈指示燈亮。

4.3.2儀器啟動15分鐘后，打開電腦，打開熒光分光光度計工作站，聯機工作。在工作站的右側出現一個綠色的顯示為Ready字樣的標志，表明電腦與儀器連接良好，可以進行下面的工作。在工作站的右側出現一豎排的指示，點擊“Method”新建一個測定方法。如果之前已經有設定完成的，可以直接沿用。

4.3.2.1 在General選項中，Measuarement有四種選擇，分別是①Wavelength scan波長掃描 ②Time scan時間掃描 ③photometry 光度值法 ④3-D Scan 三維掃描。使用者可以根據實驗的要求進行方法選擇。氯化鈉、氯化鉀的鋁鹽測量選用的是photometry光度值法。

4.3.2.2在Operator 選項中輸入操作者的名字;Instrument 顯示的是聯機儀器的型號;如果實驗需要測定樣品組、設定樣品表，則在下面的Coments 空格中進行設定，如果測定過程中有空白，則不需設定樣品表，即不選擇 Use sample table,而實驗過程中每一個樣品均需人工操作。

4.3.2.3Quantitation（定量法）界面中的操作

4.3.2.3.1在Quantitation中可選擇的定量類型有Wavelength（波長）、Peak area（峰面積）、Peak height（峰高）、Derivative（派生方法）、Ratio（比率）,選擇Wavelength（波長）。

4.3.2.3.2在Number of 選項中有：1單波長計算、2雙波長計算、3三波長計算的選項，選擇1單波長計算。

4.3.2.3.3在Calibration中選擇校準類型，選項有：None（無關聯測定樣品）、1st order（直線）、2nd order（2次方曲線）、3rd order（3次方

曲線）、Segmented（折線法），選擇1st order直線模式。

選擇None時，在后面的儀器波長設定中zui高可選擇6個可設定波長。而選擇其他選項時，可設定3個波長。

在Concentration中選擇數據單位為%（百分數）。

對Manual calibrate（手工校準）、Force curve through zero（強制曲線通過零點）均可不做選擇，又要去時按照標準操作。

Digit after decimal選項中按要求填寫十進制小數點后的位數，輸入范圍為0~~3。處設為0。

下面的Lower concentration 、Upper concentration中設定濃度的下限與上限。此處設定為0~~1000。如果被測濃度高于濃度上限，在Avg Conc 列陣上將出現“H”,如果低于濃度上限，將出現“L”.

4.3.2.4 Instrnment 界面中的操作

4.3.2.4.1Data mode 中有三種數據模式：Fluorescence 熒光強度，Luminescence 發光強度，Phosphorescence 磷光強度。選擇Fluorescence 熒光強度。

4.3.2.4.2在Wavelength中選擇波長類型：EX WL Fixed 固定的激發光波長，EM WL Fixed 固定的發射光波長，Both WL Fixed固定的的兩者波長。實驗者根據要求選擇Both WL Fixed。然后在下面的空格中填入實驗所需要的波長。

4.3.2.4.3 EX:激發光夾縫寬度，EM：發射光夾縫寬度。均選擇5nm.

4.3.2.4.4 PMT Voltage : PMT電壓。用于控制光電倍增管檢測器的電壓，從400—700V選擇一個數值：400V.

4.3.2.4.5 Auto statistic calc :自動進行數理統計計算。輸入數值后設定

須進行計算的樣品數，可計算他們的平均值、SD（標準偏差）、CV（變異系數）。設定為2.

4.3.2.4.6 Replicates:設定重復測量的數目，輸入范圍為1至20.此處設定為1.

4.3.2.4.7 Integration:積分時間。在規定的時間內獲得平均的數據值，從而獲得穩定的數據。設定時間：0.1s。

4.3.2.4.8 Delay: 掃描延遲時間，輸入范圍為0-9999s，為實驗時點擊對話框的確定按鍵后儀器默認的延遲掃描時間，也可以人為的自己控制速度而不需要設定掃描延遲時間。

4.3.2.5 在Standards界面中選擇標準的數量，在下面的空格中選擇標準的數量，并設定好標準的濃度等。

4.3.2.6 在Monitor 中設定Y軸的zui大、zui小值。一般zui大值設定為1000，zui小值為0。同時選擇 Open data processing window after data acquisition 選項。

4.3.2.7 在Report 界面中，Output 選項中選擇Print Report，同時將Print items 下面的選型根據需要進行選擇，也可全選。

4.3.3 在設定完方法后，點擊“確定”，進入工作站的測定界面。按照工作站的要求測定，前面設定的方法為None 無關聯測定樣品，首先測定的是對照品。點擊右側的 measure 選項，開始測定。將空白樣品放入檢測室后，選擇左下角的Blank（空白樣品）測定。之后將待測樣品放入檢測室，點擊Sample進行測定。每個樣品測定兩遍，自動計算平均值。之后儀器自動計算并生成檢測報告。如果某個樣品測定值不穩定，可以選擇這個樣品的數據后，點擊 Remeasure 重新測定。

待測定完成后，點擊 End 按鍵，測定結束。可直接打印報告。也可在關閉工作界面時，將文件保存在固定的文件夾中，方便以后查找數據。

4.3.4 測定完成后，關閉工作站，會顯示一個提示界面，如果下面還有其他樣品需要測定，可以選擇Close the monitor window , but keep the lamp open , 如果測定完成，則選擇Close the lamp , then close the monitor window. 這時熒光燈關閉，但是儀器內的風機繼續運轉，在30 min 后，儀器冷卻下來后，關閉左邊的電源開關。蓋上防塵罩。填寫儀器使用記錄。

4.4 注意事項

4.4.1 溶劑不純會帶入較大誤差，應先做空白檢查，必要時應用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。

4.4.2 溶液中的懸浮物對光有散射作用，必要時應用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。

4.4.3 所用玻璃儀器與熒光池等也必須保持高度潔凈。

4.4.4 溫度對熒光強度有較大影響，測定時應控制溫度一致。

4.4.5 溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。

4.4.6 測定時需注意溶液PH值和試劑的純度等對熒光強度的影響。

小結：zui后再提醒下大家檢測時所使用的比色皿一定要清洗干凈，如果有多個樣本不同的濃度，建議由低濃度到高濃度樣本你逐個檢測，防止清晰不干凈帶來的誤差。