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上海士鋒生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

小鼠免疫球蛋白E(IgE)(ELISA)試劑盒說明書

時(shí)間:2012-11-9閱讀:1032
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小鼠免疫球蛋白EIgE)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:小鼠免疫球蛋白EIgE)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿、或其它組織液中免疫球蛋白EIgE)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠免疫球蛋白EIgE)水平。用純化的IgE
體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入小鼠免疫球蛋白EIgE),再
HRP 標(biāo)記的羊抗小鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底
TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。
顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD
值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠免疫球蛋白EIgE)濃度。
試劑盒組成
1 25
倍濃縮洗滌液30ml×1 7 終止液6ml×1
2
酶標(biāo)試劑6ml×1 8 標(biāo)準(zhǔn)品(540 μg/ml 0.5ml×1
3
酶標(biāo)包被板12 ×8 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1
4
樣品稀釋液6ml×1 10 說明書1
5
顯色劑A 6ml×1 11 封板膜2
6
顯色劑B 6ml×1/12 密封袋1 個(gè)
標(biāo)本要求
1
.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2
.待檢血清1200 稀釋:具體為在試管中先按120 稀釋待檢血清(190μl 樣品稀釋
液中加10μl 待檢血清,混勻),再按110 稀釋待檢血清(取10μl120 稀釋的
待檢血清加90μl 的樣品稀釋液,混勻即可)
3
.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
4
.可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
1.
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為(360 μg/ml,240μg/ml ,120μg/ml60μg/ml 30μg/ml)。
2.
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混
勻。
3.
溫育:用封板膜封板后置37溫育30 分鐘。
4.
配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5.
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.
溫育:操作同3
8.
洗滌:操作同5。
9.
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色
15
分鐘.
10.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.
測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1
.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2
.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3
.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。
4
請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×1000)。
5
嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
6
.底物請避光保存。
7
.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8
.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9
.本試劑不同批號組分不得混用。
10.
如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
檢測范圍:
20μg/ml-400μg/ml
規(guī)格:
96
人份/
保存條件及有效期
1
.試劑盒保存:;2-8
2
.有效期:6 個(gè)月

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