1、 培養基PH濃度、小牛血清量及培養箱溫度的恒定是培養成功關鍵;
2、秋水仙素適量、適宜的處理時機和時間,是獲得良好、足夠分裂相的條件。分裂相的多少和染色體形態及帶型處理良好與否均受其影響。
3、低滲處理是獲得分散良好的分裂相關鍵步驟,低滲過度或不足都會造成染色體形態不良的結果。在低滲處理時期細胞十分嬌嫩,并且表面發粘,低滲細胞混勻時,吹打要適宜,避免細胞破碎及粘團,另外不要將細胞吸到吸管上部及離心管上部,避免細胞丟失。
4、固定技術是制備良好分散的染色體的重要步驟。若染色體分數不良,可適當加大冰乙酸含量,其同時有改善由于低滲處理不夠或固定不充分所造成的缺陷,但過量會造成染色體形態變化和影響分帶結局。染色體形態不良與固定液速度有關,加第1次固定液過快或打過快,可造成飄帶樣染色體; 5、固定液每次使用必須新鮮配制,否則將會形成酯類,從而影響固定效果。6、滴片是染色體制備中影響染色體形態的關鍵一步。首先要載玻片要非常干凈,否則會影響染色體的分散和分帶效果。其次是滴片的距離、滴加量多少、制片的方式都會影響染色體分期效果。 7、烤片:是染色體制備中zui后一步技術。烤片的溫度、時間與染色體形態和分帶有關。不宜溫度過高和烤片時間過長。
十四、染色體實驗技術分析
染色體分裂指數低:患者處于非常時期(感染期、放、期):
培養基營養成份不良;
培養基PH偏低或偏高;
PHA過量或不足;
小牛血清質量不高;
小牛血清數量偏低或過高;
培養溫度不穩定;
培養箱溫度偏低;
秋水仙素處理時間過短;
離心時間或速度不足;
制備過程損失過大。
染色體形態不理想:受檢者處于非常時期;
PHA過量;
小牛血清質量不高;
培養箱溫度不恒溫;
秋水仙素量不當;
低滲時間不理想;
低滲溫度過高;
離心速度過高;
固定液加速過快;
固定混勻手法過重;
吹片技術不良。