2.mRNA差異顯示原理
是分離差異表達基因的一個重要方法。人類大約含有三萬個不同的基因。在不同的單個細胞中只有10％的基因處于表達狀態。
生物體在不同的生理，病理狀態下，基因的表達水平不同。
生命過程中選擇性表達的基因主要有：發育與分化、體內平衡、對攻擊的應答、細胞周期調節、老化和程序性細胞死亡等。
差異顯示獲得的只是某個基因的片段，而不是直接獲得全長cDNA克隆。

3.基本程序
選擇表型特性差異顯著對象
展示mRNA的差異
基因差異
克隆與表型差異高度相關的新基因
4.技術
? 基本技術
逆轉錄（ RT ）
聚合酶鏈反應（PCR）
凝膠電泳
5.RT-PCR
? 錨定引物 T12-MN，含有12個T可以結合于mRNA 3`端 poly（A）尾，M為A、C、G 3種堿基之一，N為A、T、C、G 4種堿基之一。
? 熒光錨定引物，引物5`端加入T7 RNA多聚酶啟動子并帶有熒光分子

----------- AAAAAAAAAA –3` mRNA

------------XAAAAAAAAAAA–3` 1/3 mRNA
MTTTTTTTTTTTT（12T） Prime

---------YXAAAAAAAAAAAAA –3` 1/12 mRNA
NMTTTTTTTTTTTT（12T）Anchor Prime

?熒光錨定引物：
NMTTTTTTTTTTTT-T7 RNA多聚酶啟動子-熒光分子
（Genomyx company）

因此共有12種錨定引物
?同位素標記錨定引物

?隨機引物（Arbitrary Prime）
可以隨機地與cDNA不同位置多個位點結合，擴增出不同長度的cDNA片段混合物。
共20種隨機引物，隨機引物-M13
?隨機和錨定引物的多種組合可以展示10000-15000種mRNA

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mRNA差異顯示技術

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