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如何進行大規(guī)模培養(yǎng)常用方法

時間:2014/9/25閱讀:701
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根據(jù)動物細胞的類型,可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進行大規(guī)模培養(yǎng)。 

一、動物細胞生長特性及培養(yǎng)溫度  
      1.細胞生長緩慢,易污染,培養(yǎng)需用抗生素  
      2.細胞大,無細胞壁,機械強度低,環(huán)境適應(yīng)性差  
      3.需氧少,不耐受強力通風(fēng)與攪拌  
      4.群體生應(yīng),貼壁生長(錨地依賴性)  
      5.培養(yǎng)過程產(chǎn)品分布細胞內(nèi)外,成本高  
      6.原代培養(yǎng)細胞一般繁殖50代即退化死亡 

依據(jù)在體外培養(yǎng)時對生長基質(zhì)依賴性差異,動物細胞可分為兩類: 
      貼壁依賴型細胞:需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長,大多數(shù)動物細胞,包括非淋巴組織細胞和許多異倍體細胞均屬于這一類。  
      非貼壁依賴型細胞:無需附著于固相表面即可生長,包括血液、淋巴組織細胞、許多腫瘤細胞及某些轉(zhuǎn)化細胞。 

培養(yǎng)細胞的zui適溫度相當(dāng)于各種細胞或組織取材機體的正常溫度。人和哺乳動物細胞培養(yǎng)的zui適溫度為35~37℃。偏離這一溫度,細胞正常的代謝和生長將會受到影響,甚至死亡。總的來說,培養(yǎng)細胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時,細胞代謝強度與溫度成正比;細胞培養(yǎng)置于39~40℃環(huán)境中1h,即受到一定損傷,但仍能恢復(fù);當(dāng)溫度達43℃以上時,許多細胞將死亡。當(dāng)溫度下降到30~20℃時,細胞代謝降低,因而與培養(yǎng)基之間物質(zhì)交換減少。首先看到的是細胞形態(tài)學(xué)的改變以及細胞從基質(zhì)上脫落下來。當(dāng)培養(yǎng)物恢復(fù)到初始的培養(yǎng)溫度時,它們原有的形態(tài)和代謝也隨之恢復(fù)到原有水平。 

二、貼壁培養(yǎng)(attachment culture)是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng)。 

1.生長特性:貼壁依賴型細胞在培養(yǎng)時要貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上,細胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進入對數(shù)生。一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面,并形成致密的細胞單層。 

2.貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點:  
      容易更換培養(yǎng)液;細胞緊密黏附于固相表面,可直接傾去舊培養(yǎng)液,清洗后直接加入新培養(yǎng)液。  
      容易采用灌注培養(yǎng),從而達到提高細胞密度的目的;因細胞固定表面,不需過濾系統(tǒng)。  
      當(dāng)細胞貼壁于生長基質(zhì)時,很多細胞將更有效的表達一種產(chǎn)品。  
      同一設(shè)備可采用不同的培養(yǎng)液/細胞的比例。  
      適用于所有類型細胞。 

3.貼壁培養(yǎng)的缺點:與懸浮培養(yǎng)法相比  
      擴大培養(yǎng)比較困難,投資大;  
      占地面積大;  
      不能有效監(jiān)測細胞的生長;  

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