如何進行新生牛血清的篩選

時間：2014/9/15閱讀：1200

實驗原理
牛血清是細胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一。在培養(yǎng)基中加入適量血清（10%），首先可以補充細胞生長所需的生長因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性；再次，它還能中止的作用，并保護細胞免受機械損傷等。但是血清成分復雜，不同來源、不同批號生產(chǎn)的血清對細胞生長作用的差異較大。血清的保存期只有一年，不同存放時期的血清的效力也不同。所以，當新購得的血清或要在開始一個重大試驗的時候，應首行牛血清的篩選。
篩選時，通常選用正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞，也可以使正要準備培養(yǎng)的細胞。另外，用已知血清作對照。

儀器、材料和試劑
儀器
CO2 培養(yǎng)箱，超凈工作臺，微量加樣器，滅菌鍋
材料
96孔培養(yǎng)板，刻度吸管，移液管，試管，吸管，廢液缸，血球計數(shù)板，HeLa細胞，Mel細胞
試劑
DMEM，不同批號的血清，，雙抗

實驗步驟
1.取HeLa細胞和Mel細胞（本來應該取正常的二倍體細胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細胞，但是實驗室條件有限，本組做HeLa細胞），消化后，用無血清培養(yǎng)基（事先加雙抗）吹打成細胞懸液（避免以前血清的干擾）。計數(shù)。
2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的*孔（在加之前要震蕩培養(yǎng)基）。本實驗經(jīng)計數(shù)后應加11μL細胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含標準血清(2004.12)的培養(yǎng)基。（對照組）
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標準血清的培養(yǎng)基。
5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個孔到zui后一個孔的細胞梯度從大約2056，1028等至1個。（要吹細均勻）
6.每個孔再補加100μL含標準血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營養(yǎng)物質(zhì)。
7.在B行采取同樣的方法。不同的是用含有需篩選的批號為011217血清代替標準血清。
8.在C至G行采用同樣的方法。血清批號分別是030224，040528，040830，041012，041016。
9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周。
10. 培養(yǎng)結(jié)束后，觀察細胞生長的情況。比較在同一細胞濃度下的不同學清對細胞生長的影響。在同一細胞濃度下細胞生長數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。

實驗結(jié)果
從第五行開始計數(shù)，結(jié)果見下表
集落數(shù)第5行
第6行

第7行

第8行

第9行

第10行

第11行

第12行

A
00

實驗中，我們可以看出C組細胞的集落數(shù)是zui多的（相對于同一列的來說）。C組細胞是用批號為030224的血清來培養(yǎng)的，這說明030224號血清更能促進HeLa細胞的生長。在別的同學所作的實驗中，是E組的Mel細胞生長的，這說明040830更能促進Mel細胞的生長。由此看出，不同細胞是適應不同的血清的，不能一概而論。A組和H組是對照組，但并沒有長出細胞集落。這個情況在全班中普遍存在，這可能是對照組血清有問題或者做實驗時根本沒有加血清。

實驗討論
牛血清是細胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一，對細胞生長有廣泛影響。在細胞培養(yǎng)時，我們通常會加入10%的血清。血清的質(zhì)量對細胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。一般說來，牛血清包括以下成分：生長因子（如激素，白細胞介素等），他們可以促進細胞生長；貼附因子，他們可以促進細胞的貼壁，往往只有細胞貼壁才能增值（懸浮培養(yǎng)的細胞除外）；蛋白質(zhì)（如血清白蛋白，球蛋白等），既可以作為營養(yǎng)物質(zhì)，又可以中止的作用；還有很多成分不明的物質(zhì)。血清還可以起到解毒作用，如脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細胞免受機械損傷。
不同廠家，不同批次生產(chǎn)的血清質(zhì)量不同，對細胞生長的作用不同，所以在拿到一個新血清或者開始重大科研實驗時，要進行新生牛血清的篩選。有些血清可能有支原體污染；不同血清對不同細胞的促進作用不同；血清放置一段時間后，營養(yǎng)價值會降低，所以有必要進行新生牛血清的篩選。新生牛血清zui適宜被試細胞生長的血清可以用于的實驗。
本實驗中是一次加上所有的細胞的。這樣使得每一排的細胞總數(shù)的差異減到zui小，從而使得系統(tǒng)誤差減小；而且，這種方法方便快捷，效率也有所提高；試驗結(jié)果顯示，我們的這種方法卻是較為*。

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