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上海研拓生物科技有限公司

重組DNA轉化實驗-上海研拓

時間:2012-6-11閱讀:310
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        帶有外源DNA的片段的重組體分子在體外構建成后,需要導入適當的宿主細胞內進行繁殖或表達出具有一定生物活性的蛋白。能夠作為重組體轉化的受體,主要有動物細胞、植物細胞、微生物細胞等。導入受體細胞的途徑重要有轉化(轉染),顯微注射和電穿孔等多種不同的方式。可以根據不同的受體選擇不同的導入方式。一般情況下,細菌一類的原核生物和酵母這樣的低等真核細胞可用轉化方式導入,而高等動植物細胞則需采用顯微注射或電穿孔來進行。

       細菌表面通過CaCl處理后,局部失去細胞壁或細胞壁溶解,DNA分子能夠通過質膜進入細胞。其進入細胞的方式是完整的雙鏈DNA分子首先吸附到細胞表面,雙鏈DNA分子解鏈變成單鏈,單鏈DNA分子一條進入受體細胞內,另一條被降解。進入細胞內的單鏈DNA則復制成雙鏈環狀DNA,隨同復制子同時復制,并被轉錄翻譯。

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