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培養基：三丁酸甘油酯瓊脂培養基，是在酵母浸膏瓊脂中加入三丁酸甘油酯制成， pH為7,5三丁酸甘油酯加入后，會發生乳化作用，因此，制作時用電動混合器或電 動攪拌器作為攪拌工具。連續3d蒸汽滅菌，每次30min。培養基可鋪成平板使用，先將 酵母浸膏瓊臘培養基鋪成平板，再將5mL熔化的二丁酸甘油酯瓊脂培養基覆蓋在酵母浸 膏瓊I旨上。也可以使用市售的配制好的培養基。
平板劃線接種,橫穿表面劃線一次，在*生長溫度培養2~14dc 結果記錄：三丁酸甘油酯水解使培養基變得透明，井形成一個清晰環帶，以毫米為單 位記錄下從菌落邊緣到清晰環帶邊緣的寬度。該反應通常被認為是脂肪酶的典型反應， 但sierra(1964)曾報道，雖然三丁酸甘油酯不是結構復雜的脂肪，細菌的蛋白水解酶也能 將其水解。
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