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每一物種的細胞一般都具有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體,在秋水仙素的作用下可使分裂細胞阻斷在中期,此時染色體形態(tài)zui典型,然后通過低滲、固定、染色等步驟,便可在顯微鏡下呈現(xiàn)出其形態(tài)。
實驗用品
器具:顯微鏡、培養(yǎng)皿、*、鑷子、冷凍載片、滴管
試劑:秋水仙素、生理鹽水、甲醇、冰醋酸、低滲液、PH6.8 磷酸緩沖液、Giemsa 染色液
材料:蟾蜍
實驗方法步驟
1. 前處理 實驗前3-4 小時,按每克體重3ug 劑量給蟾蜍的腹腔注射秋水仙素;
2. 取材 打開蟾蜍腹腔,截取1-2cm 長的一段小腸(以十二直腸為好),用見到剖開成片狀,在生理鹽水中洗凈;
3. 低滲 將洗凈的小腸投入到盛有5mL 低滲液的小試管中,在37℃水浴下處理30 分鐘以上;
4. 固定 棄去低滲液,加入新配制的甲醇(3):冰乙酸(1)固定液約5ml,靜止固定40分鐘左右;
5. 解離 棄去固定液,加入約2ml60%的冰乙酸,輕輕搖動,使解離的細胞充分散開,5 分鐘后棄去小腸,即得細胞懸浮液;
6. 滴片 吸取少許細胞懸浮液,在適當?shù)母叨鹊?-4 滴于冰冷的載片上,迅速吹斜氣;
7. 干燥 滴片自然風干或吹風機吹干;
8. 染色 在載片上滴十滴磷酸緩沖液,再滴一滴Giemsa 染液,橡皮球輕輕吹均勻,染色30 分鐘左右;
9. 觀察 吹干后在顯微鏡下觀察。
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