當前位置:源葉標準品網>>技術文章>>脂肪酸的β-氧化—酮體測定法
(一)原理
酮體包括乙酰乙酸、b —羥丁酸和丙酮三種物質。在肝臟中,脂肪酸經b —氧化作用生成乙酰CoA。生成的乙酰CoA可經代謝縮合成乙酰乙酸,而乙酰乙酸既可脫羧生成丙酮,又可經b —羥丁酸脫氫酶 作用被還原生成b —羥丁酸,三種物質統稱酮體。酮體為機體代謝的正常中間產物,在肝臟中生成后須被運往肝外組織才能被機體所利用。在正常情況下,動物體內含量甚微;患糖尿或食用高脂肪膳食時,血中酮體含量增高,尿中也能出現酮體。
本實驗用丁酸做底物,將之與新鮮的肝勻漿一起保溫后,再測定其中酮體的生成量。
因為在堿性溶液中碘可以將丙酮氧化為碘仿(CHI3 ),所以通過用*(Na2 S2 O3 )滴定反應中剩余的碘就可以計算出所消耗的碘量,進而可以求出以丙酮為代表的酮體含量。有關的反應式如下:
根據滴定樣品與滴定對照所消耗的硫酸鈉溶液體積之差,可以計算由丁酸氧化生成丙酮的量。
(二)試劑及器材
(1)10%(w/v)氫氧化鈉溶液:稱取10g氫氧化鈉,在燒杯 中用少量蒸餾 水將之溶解后,定容至100ml。
(2)0.1mol/L正丁酸溶液:稱取13g碘和約40g*,放置于研缽 中。加入少量蒸餾 水后,將之研磨至溶解。用蒸餾水定容到1000ml,在棕色瓶中保存。此時可用標準*溶液標定其濃度。
(3)0.5mol/L正丁酸:取0.05ml正丁酸,用0.5mol/L氫氧化鈉溶液100ml溶解即成。
(4)0.1mol/L*(KIO3 )溶液:稱取0.8918g干燥的*,用少量蒸餾水將之溶解,zui后定容至250ml
(5)0.1mol/L*(Na2 S2 O3 )溶液:稱取25g*,將它溶解于適量煮沸的蒸餾水中,并繼續煮沸5min。冷卻后,用冷卻的已煮沸過的蒸餾水定容到1000ml。此時即可用0.1mol/L*溶液標定其濃度。
(6)*溶液的標定:將蒸餾水25ml、*2g、*0.5g、10%鹽酸溶液20ml加入一支錐形瓶內。另取0.1mol/L*溶液25ml加入其中,然后用*溶液將之滴定至淺黃色。再加入0.1%淀粉溶液2ml,然后繼續用*溶液將之滴定至藍色消褪為止。
另設一空白,其中僅以蒸餾水代替*,其余操作相同。計算*溶液的濃度所依據的反應式如下:
5KI+KIO3 +6HCI=3I2 +6KCI+3H2 O
I2 +2Na2 S2 O3 =Na2 S4 O6 +2NaI
(7)10%(v/v)鹽酸溶液:取10ml鹽酸,用蒸餾水稀釋到100ml。
(8)0.1%(w/v)淀粉溶液:稱取0.1g可溶性淀粉,置于研缽 中。加入少量預冷的蒸餾水,將淀粉調成糊狀。再慢慢倒入煮沸的蒸餾水90ml,攪勻后,再用蒸餾水定容至100ml。
(9)0.9%(w/v)CaCl。
(10)1/15mol/L、PH7.7磷酸緩沖液
(A液)1/15mol/L Na2 HPO4 溶液:稱取Na2 HPO4 ·2H2 O1.187g,將之溶解于100ml蒸餾水中即成。
(B液)1/15mol/L KH2 PO4 溶液:稱取KH2 PO4 0.9078g,將之溶解于100ml蒸餾水將之溶解,zui后定容至100ml。
取A液90 ml、B液10 B液,將兩者混合即可。
(12)勻漿器(或攪拌機)、碘量瓶。
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