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細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒（NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

該試劑盒包含兩種主要的染料NucViewTM 488 caspase-3 底物和MitoViewTM 633線粒體染料，可以非常方便的同時(shí)顯示細(xì)胞凋亡中Caspase-3的活力以及線粒體膜電位的變化。方法可以選擇流式細(xì)胞術(shù)或者熒光顯微鏡，兩種染料的光譜分離使得熒光的重疊現(xiàn)象降為Z小。

詳細(xì)介紹

該試劑盒包含兩種主要的染料NucView^TM 488 caspase-3 底物和MitoView^TM 633線粒體染料，可以非常方便的同時(shí)顯示細(xì)胞凋亡中Caspase-3的活力以及線粒體膜電位的變化。方法可以選擇流式細(xì)胞術(shù)或者熒光顯微鏡，兩種染料的光譜分離使得熒光的重疊現(xiàn)象降為zui小。

試劑盒原理：

Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活。活化的Caspase-3能夠特異切割底物DEVD-NucView 488。根據(jù)這一特點(diǎn)，Biotium 將一段帶有大量負(fù)電荷的DEVD肽連接到一種能和DNA結(jié)合的染料上。底物本身不能產(chǎn)生熒光，但是這種底物可以快速的穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并在這里被活化的Caspase-3剪切，從而釋放出和DNA有高親和力的染料，釋放出來的染料遷移進(jìn)入細(xì)胞核并把細(xì)胞核染成亮綠色。根據(jù)釋放的熒光強(qiáng)度的大小，可以測(cè)定caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的程度。從這里我們可以得出：這個(gè)熒光底物不同于傳統(tǒng)的底物，它實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞 Caspase-3 活性檢測(cè)的同時(shí)染色細(xì)胞核DNA，具有典型的雙功能性。

線粒體跨膜電位的降低是細(xì)胞凋亡早期的不可逆事件，引起一系列線粒體相關(guān)變化。MitoView^TM 633是一種遠(yuǎn)紅外線粒體熒光染料（一種親脂性陽離子化合物），在正常細(xì)胞中依據(jù)線粒體膜電位（外正內(nèi)負(fù)）的存在，逐漸擴(kuò)散進(jìn)質(zhì)膜并沉積在線粒體內(nèi)，在激發(fā)光下放出熒光，可以非常方便地使用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡來觀察線粒體的形態(tài)和移動(dòng)的變化情形。例如下圖，活的Hela細(xì)胞用MitoView^TM 633染色結(jié)果

HeLa cells were stained with MitoView 633 for 30 min, rinsed in PBS, and fluorescence was visualized on an Olympus epifluorescence microscope using a Cy5 filter. Image is a representative live HeLa cell stained with MitoView 633.

但是，在開始凋亡細(xì)胞中，線粒體膜電位的降低，MitoView^TM 633染料不會(huì)（或少量）進(jìn)入線粒體，這樣，開始凋亡細(xì)胞相對(duì)于健康活細(xì)胞來說，被MitoView^TM 633染色很少或者沒有，與caspase-3底物DEVD-NucView 488形成一種負(fù)相關(guān)的關(guān)系，如下圖所示：

Microscopy of Jurkat cells stained with NucViewTM 488 and MitoViewTM 633. Healthy cells are strongly stained with MitoView^TM 633 （red） while the apoptotic cell with fragmented nucleus is strongly stained with NucView^TM 488 （green）. There is an inverse correlation between these probes.

某種情況下，尋找NucView^TM 488 和MitoView^TM 633熒光染料合適的工作液濃度非常重要，有一些高濃度情況下，這些染料探針有可能對(duì)細(xì)胞的其他結(jié)構(gòu)進(jìn)行著色。

試劑盒內(nèi)容物：

1 vial （100 μL）; NucView^TM 488 Caspase-3 substrate, 200X in DMSO

1 vial （100 μL）; MitoView^TM 633 Mitochondrial Dye, 200X in DMSO

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
30062	NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Kit 細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒	100次

其它細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)產(chǎn)品：

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

70055

MitoView 633

20 X 50ug

10400

NucView^TM 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in 1X PBS

100 uL

30001

JC-1 mitochondrial membrane potential detection kit

100 assays

30008-1

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit （25 assays）

kit

30008-2

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric & Colorimetric Assay Kit （100 assays）

kit

30009-1

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

1 mL

30009-2

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

10 mL

30009-3

Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

100 mL

30011-1

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit

25 assays

30011-2

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric and Colorimetric Assay Kit

100 assays

30012-1

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

1 mL

30012-2

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

10 mL

30012-3

Caspase-8 IETD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit

100 mL

30017

Apoptosis & Necrosis Quantification Kit

50 assays

30018

Apoptotic, Necrotic & Healthy Cells Quantification Kit

50 assays

30019

MCB Glutathione Detection Kit

100 assays

30029

NucView^TM 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells

活細(xì)胞caspase-3熒光檢測(cè)試劑盒

100 – 500A

30030

NucView^TM 488 caspase-3 substrate and sulforhodamine 101-annexin V （also called Texas Red^TM-annexin V）dual apoptosis assay kit

雙凋亡檢測(cè)試劑盒

50 - 250 assays

30060

CF488A Annexin V and 7-AAD Apoptosis Kit

細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒

100 assays

30061

CF488A Annexin V and PI Apoptosis Kit

細(xì)胞凋亡熒光檢測(cè)試劑盒

100 assays

70054

MitoView Green

20X50ug