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大鼠（Rat）睪酮（T）ELISA檢測試劑盒
點擊次數：604 發布時間：2016-6-21
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗 （ ELISA ） 。 往先包 被 睪酮（ T ） 抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、 H標記的檢測抗體 ， 經過溫育并*洗滌 。 用底物 TMB 顯色 ， TMB 在氧化物酶的催化下轉化成藍色 ， 并在酸的作用下轉化成zui終的黃色顏色的深淺和樣品中的 睪酮 （ T ） 呈 正相關 。 用酶標儀在 450nm 波下測定吸光度（ OD 值 ） ，計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清 ： 使用不含熱原和內毒素的試管 ， 操作過程中避免任何細刺激 ， 收集血液后 ， 3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心分離。
2. 血漿 ： EDTA 、 檸檬酸鹽或肝素抗凝 。 3000 轉離心 30 分鐘取上清
3. 細胞上清液： 3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿 ： 將組織加入適量生鹽水搗碎 。 3000 轉離心 10 分鐘取上清。
5. 保存 ： 如果樣本收集后不及時檢測 ， 請按一次用量分裝 ， 凍存于-20 ℃ ，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍 。
自備物品
1. 酶標儀（ 450nm ）
2. 高精度加樣器及槍頭 ： 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL
3. 37 ℃ 恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中 ， 密封 （ 低溫干燥 ） 保存 。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白，按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍，zui終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱 96孔配置 48孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔 × 8 條 12 孔 × 4 條 無
標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無
* 6 mL 3 mL 無
檢測抗體 -HRP 10mL 5mL 無
20 × 洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
注：標準品（ S0-S5 ）濃度 依次 為： 0 、 20 、 40 、 80 、 160 、 320 p g/mL
試劑的準備 試劑的準備 試劑的準備 試劑的準備
20 × 洗滌緩沖液的稀釋 ： 蒸餾水按 1 ： 20 稀釋 ， 即 1 份的 20 × 洗滌緩
沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條 ， 剩余板條用自封袋密封放回 4 ℃ 。
2. 設置標準品孔和樣本孔 ， 標準品孔各加不同濃度的標準 品 50 μ L ；
3. 待測樣本孔先加 樣本 10 μ L ， 再 加* 4 0 μ L ( 即樣本稀 釋5 倍 ) ； 空白孔不加。
4. 除空白孔外， 標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（ HRP ）標記的檢測抗體 100 μ L ，用封板膜封住反應孔， 37 ℃ 水浴鍋或恒溫箱溫育 60min 。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min ，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板 ） 。
6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。
7. 每孔加入終止液 50 μ L ， 15min 內 ， 在 450nm 波長處測定各孔OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對OD 值作縱坐標 ， 繪制出標準品線性回歸曲線 ， 按曲線方程計算各本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等 于0.9900 。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于 1.0 pg/mL 。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于 15% 。
5. 貯藏： 2-8 ℃ ，避光防潮保存。
6. 有效期： 6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或 人 體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。