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上海金穗生物科技有限公司

連接scFv和載體DNA并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，構(gòu)建scFv突變文庫(kù)

時(shí)間：2013-1-14閱讀：367
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[方法]
1．配制1個(gè)50ul連接混合液，包含：
● 10×連接緩沖液，5uI
● 水，16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl（100g／ul）， 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文庫(kù)（100g/ul）, 7ul
● T4 DNA連接酶（400U／ul），2ul
2．16℃孵育反應(yīng)液過(guò)夜。
3．乙醇沉淀DNA并用70％乙醇洗滌沉淀1次。
4．重懸DNA于10ul水中。
5．用4份相同的2．5ul的DNA分別電轉(zhuǎn)化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細(xì)胞中。
6．確定文庫(kù)容量，并將菌文庫(kù)材抖儲(chǔ)存于-70℃。

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