(一)親和細胞化學方法斷
該方法的基本原理見本書第五章“親和免疫組織化學技術”。將各種可標記的熒光染料標記在*或鏈霉親和素(streptavidin)上,通過*化二抗與特異性一抗結合,鏈霉親和素—熒光染料再與二抗上的*結合,使更多的熒光染料結合到抗原抗體部位,此時如熒光信號不夠強,還可用*化熒光染料與未飽和的鏈霉親和素結合,使信號得到進一步放大。
如果還想對信號作進一步放大,可用抗熒光素的標記熒光二抗,或用*標記抗親和素二抗,然后再用熒光素標記鏈霉親和素,其原始信號能更進一放大。
(二)級聯抗體放大法
級聯抗體放大法是利用現有的抗熒光素、抗第二抗體和抗半抗原(*、地高辛等)抗體對信號進行放大。例如間接法免疫熒光染色(FITC)后,可用抗FITC標記熒光素與FITC結合,也可用抗FITC標記AKP使其改變顏色,還可以用抗標記有熒光素的二抗與間接法上二抗結合,使信號進一步放大。
放大信號的步驟越多,其敏感性肯定越高,但其特異性可能會得不到有效保證。目前上述試劑均有商品化供應,只有合理使用,級聯放大作用才能發揮zui大效果,使非特異性染色降低到zui低。