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抗原修復——原因
*常規的石蠟切片標本均用甲醛固定,結果使得:
-抗原性物質形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇;
-蛋白之間發生交聯而使抗原決定簇隱蔽。
*要求:在染色時,需要*行抗原修復或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯破壞,而恢復抗原的原有空間形態。
抗原修復——方法
*化學方法
*加熱方法
-水浴加熱法
-微波照射法
-高壓加熱法
-酸水解法
(1) 化學方法
*主要是通過一些酶的作用,使抗原決定簇暴露。常用的酶有:*、*等。
C,10~40min,主要用于細胞內抗原的顯示;°-*:一般使用濃度為0.05%~0.1%,消化時間為37
C、30~180min,主要用于細胞間質抗原的顯示。°-*:一般使用濃度為0.1%~0.4%,消化時間為37
*例如:Laminin、CollagenIV
(2) 水浴加熱法
*將玻片放入裝有抗原修復液的容器中,加熱至沸騰,持續10~15分鐘。
-優點:操作簡單、經濟,適用于所有的實驗室,
-缺點:對封閉牢固的抗原決定簇暴露不理想。
(3) 微波照射法
*將玻片放入裝有抗原修復液的容器中,置微波爐加熱至95℃以上,持續l0~15分鐘,冷卻后,按免疫組化染色步驟進行。
*此方法由于微波場內極性分子、離子高速運動,撞擊交聯的網鏈,使抗原異常的構想恢復正常,且因分子運動產熱、效率高、時間短,對抗原再現效果好。
(4) 高壓加熱法暴露抗原
*將玻片浸入抗原修復液內,置高壓鍋中高壓2~3min,可取得*的效果。
*由于高壓下受熱均勻,特別使用于大批量標本的染色。
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