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血管緊張素原抗體

時間:2013-2-26閱讀:357
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血管緊張素原抗體

抗原準備

抗原,是指能夠刺激機體產生(特異性)免疫應答,并能與免疫應答產物抗體和致敏淋巴細胞在體外結合,發生免疫效應(特異性反應)的物質。抗原的基本特性有兩種,一是誘導免疫應答的能力,也就是免疫原性,二是與免疫應答的產物發生反應,也就是抗原性。

很多物質都可以成為抗原,抗原的具體分類可以參見抗原,在進行單克隆抗體制備過程中,很多物質都可以成為抗原,在常規的科研實驗中,科研者經常選用每只小鼠/大鼠每次注射10~50ug 重組蛋白、偶聯多肽、偶聯小分子等作為抗原產生特異性的單克隆抗體。

動物免疫

單克隆抗體制備的宿主動物一般選用Balb/c小鼠,鼠單抗的應用范圍相當廣泛,也有一些公司聲稱開發出了兔的單克隆抗體制備技術。

免疫原分為可溶性抗原和顆粒性(細胞)抗原,用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合,腹腔注射抗原與佐劑*混勻后形成的穩定乳狀液,在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫血管緊張素原抗體

周期 1 采血0.2ml(獲得0.1ml免疫前血清)

*次免疫(抗原加弗氏*佐劑)

14 第二次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)

21 采血和ELISA檢測

35 第三次免疫(抗原加弗氏不*佐劑)

42 采血和ELISA檢測

56 第四次免疫(抗原溶于PBS或鹽水)

61 細胞融合

免疫動物 免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠,按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官,刺激相應B淋巴細胞克隆,使其活化、增殖,并分化成為致敏B淋巴細胞。
  2
、細胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠,無菌操作取出脾臟,在平皿內擠壓研磨,制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合,形成雜交瘤細胞。

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