雞白痢、雞傷寒抗體說明，Anti-pullorum價格

時間：2013-2-25閱讀：776

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1. WB

A.樣品準備

注意：細胞培養(yǎng)基產品包括經典和特殊培養(yǎng)基，血清，培養(yǎng)基添加物，誘導物，抗生素。產品列表等信息請登陸查詢。

單層細胞

室溫下，移去培養(yǎng)基并用PBS沖洗直徑100mm的培養(yǎng)皿。以下步驟均在冰上或4℃操作，使用冰預冷的新鮮緩沖液。

加入0.6ml RIPA裂解液（sc-24948）。4℃輕輕晃動細胞培養(yǎng)皿15min。用細胞刮將貼壁細胞刮下。轉移裂解液至微量離心管內。

用0.3ml RIPA裂解液洗一次培養(yǎng)皿，將洗液與之前的溶解物合并。（可選擇：加入10μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲存液和/或用21號注射器針頭切割DNA）冰上孵育30-60min。

將細胞溶解物4℃離心，10000×g，10min。轉移漢細胞裂解物的上清至新的離心管內，棄沉淀。

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注意：涉及磷酸化作用研究時，可用PhosphoCru^TM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細胞溶解物中的磷酸化蛋白。

懸浮細胞

室溫低速離心5min，收集約2.0×10⁷個細胞。小心除去培養(yǎng)基。

室溫下用PBS沖洗細胞沉淀，再次低速離心5min，小心除去培養(yǎng)基。

加入1.0ml冰預冷的RIPA裂解液（sc-24948），裂解液中現(xiàn)用現(xiàn)加入蛋白酶抑制劑和/或磷酸酶抑制劑。用移液器輕輕懸浮細胞，冰上孵育30min。

用21號注射器針頭、杜恩斯勻漿器或超聲進一步破壞使細胞均質化。注意不要使裂解物溫度過高。（可選擇：加入10μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲存液。）冰上孵育30min。

將裂解液轉移至離心管，4℃離心，10000×g，10min。轉移上清至新的離心管內，棄去沉淀。

注意：涉及磷酸化作用研究時，可用PhosphoCru^TM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細胞溶解物中的磷酸化蛋白。

組織樣品

稱重組織塊，并用干凈的剃刀剪碎。冰凍組織可被切的很薄，并在含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液（sc-24948）中解凍。3ml冰預冷的RIPA/g組織。

杜恩斯勻漿器或超聲進一步破壞使細胞均質化，溫度維持在4℃。（可選擇：加入30μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲存液/g組織。）冰上孵育30min。

將裂解液轉移至離心管，4℃離心，10000×g，10min。棄沉淀。可加長離心時間獲得更好的裂解產物。

注意：涉及磷酸化作用研究時，可用PhosphoCru^TM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細胞溶解物中的磷酸化蛋白。

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