熒光素標記*激酶C抗體IgG，Anti-Trk C/FITC

在Western bloting實驗中，有另一種方法，就是直接標記一抗，再用底物顯色。這種方法叫直接法，與用二抗的間接法相比有諸多不足，標記二抗可用于很多種不同特異性的一抗，避免了標記很多一抗的需要，同時因為一抗結合不止一個二抗分子，所以二抗可以增強信號。所以一般情況下都釆用間接法進行檢測。

Western bloting首先是要將電泳后分離的蛋白從凝膠中轉移到NC膜上，通常有兩種方法：毛細管印跡法和電泳印跡法。毛細管印跡法是將凝膠放在緩沖液浸濕的濾紙上，在凝膠上放一片NC膜，再在上面放一層濾紙等吸水物質并用重物壓好，緩沖液就會通過毛細作用流過凝膠。緩沖液通過凝膠時會將蛋白質帶到NC膜上，NC膜可以與蛋白質通過疏水作用產生不可逆的結合。但是這種方法轉移效率低，通常只能轉移凝膠中的一小部分蛋白質（10%-20%）。而電泳印跡可以更快速有效的進行轉移。這種方法是用有孔的塑料和有機玻璃板將凝膠和NC膜夾成“三明治”形狀，而后浸入兩個平行電極中間的緩沖液中進行電泳，選擇適當的電泳方向就可以使蛋白質在電場力的作用下離開凝膠結合到NC膜上。常用的電泳轉移方法有濕轉和半干轉。兩者的原理*相同，只是用于固定膠/膜疊層和施加電場的機械裝置不同。濕轉是一種傳統方法，將膠/膜疊層浸入緩沖液槽然后加電壓。這是一種有效方法但比較慢，需要大體積緩沖液且只能用一種緩沖液。半干轉移，用浸透緩沖液的多層濾紙代替緩沖液槽。與濕轉相比，這種方法要快（15-45 分鐘）。