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熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子C型抗體IgG相關(guān)知識

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熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子C型抗體IgG相關(guān)知識

組織的非特異性染色的機理很復雜,其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點: 
1)一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去 
 
2)抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白,可與組織成分結(jié)合。 
3)除去檢查的抗原以外,組織中還可能存在類屬抗原(如Forssman氏抗原),可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。 
4)從組織中難于提純抗原性物質(zhì),所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體,以致容易混淆。 
5)抗體分子上標記的熒光素分子太多,這種過量標記的抗體分子帶過多的陰離子,可吸附于正常組織上而呈現(xiàn)非特異性染色。 
6)熒光素不純,標本固定不當?shù)取?/span>

消除熒光抗體非特異性染色的方法應(yīng)根據(jù)產(chǎn)生的原因采取適當?shù)姆椒ǎS玫姆椒ㄓ幸韵聨追N: 
(一)動物臟器粉末吸收法 
常用肝粉(豬、大白鼠或小白鼠),其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50100mg,離心管中充分混勻,在室溫中振動2h4中過夜,再攪拌10min,高速離心(300015000r/min30min12次后,即可使用其上清液。吸收一般應(yīng)在臨用前進行,吸收后之熒光抗體保存冰箱中勿超過2周。染色應(yīng)作吸收前后之比較,吸收時可先用緩沖鹽水將組織干粉浸濕,離心(300015000r/min30min,除去上清液,再加入熒光抗體進行吸收,以免消耗過多的抗體。 
肝粉或新鮮細胞吸收是一種非特異性的消除方法,對熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時,也可用相同的組織干粉或勻漿沉淀物吸收之。 
用臟器肝粉吸收對熒光抗體損失較多,如果根據(jù)Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液,用生理鹽水洗23次,12000r/min 
10min
離心沉淀,用其沉淀物吸收其熒光抗體即能*達到目的,京極方久氏認為這樣吸收對熒光抗體幾乎沒有損失,他們常用此法,效果甚佳,吸收后放置一周左右,用時有必要再吸收一次。

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