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人基質金屬蛋白酶7 ELISA試劑盒

時間:2012-5-3閱讀:266
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人(Human)基質金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

試驗原理:
MMP-9試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知MMP-9濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將MMP-9和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中MMP-9的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:400ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
*標記的抗MMP-9抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
400 ng/ml (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200 ng/ml (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ng/ml (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ng/ml (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ng/ml (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 ng/ml (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。


試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的MMP-9標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的MMP-9含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-400ng/ml

4、敏感度: 1.0 ng/ml
 

FA00107B 人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 Human Matrix metalloproteinase 7,MMP-7 ELISA試劑盒
FA00108B 人基質金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISA試劑盒  Human Matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA試劑盒
FA00109B 人血管內皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3)ELISA試劑盒 Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 3,VEGFR-3 ELISA試劑盒
FA00110B 人血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)ELISA試劑盒 Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2 ELISA試劑盒
FA00111B 人血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1)ELISA試劑盒 Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1,VEGFR-1 ELISA試劑盒
FA00112B 人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒 Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D,VEGF-D ELISA試劑盒
FA00113B 人血管內皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒 Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA試劑盒
FA00114B 人血管內皮細胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒 Human Vascular Endothelial cell Growth Factor B,VEGF-B ELISA試劑盒
FA00115B 人血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒  Human Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA試劑盒
FA00116B 人血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒  Human Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA試劑盒
FA00117B 人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 4,TRAIL-R4 ELISA試劑盒
FA00118B 人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3)ELISA試劑盒 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,TRAIL-R3 ELISA試劑盒
FA00119B 人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體1(TRAIL-R1)ELISA試劑盒 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,TRAIL-R1 ELISA試劑盒
FA00120B 人血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒 Human Thrombopoietin,TPO ELISA試劑盒
FA00121B 人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒 Human Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA試劑盒
FA00122B 人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒  Human Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA試劑盒
FA00123B 人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒 Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA試劑盒
 

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