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以下是我公司研究人為您整理地關于蛋白胨細胞的冷凍保存方法：

（1）傳統方法: 冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16～18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內冰晶過大，造成蛋白胨細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

（2）程序降溫：利用已設定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

步驟：

（1）冷凍前24-48小時更換半量或全量培養基，使細胞處于指數生長期。

（2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養基、血清，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

（3）離心收集培養之細胞，用加血清的培養基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數細胞濃度及凍前存活率。

（4）取與蛋白胨細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液（DMSOzui后濃度為5～10％），使細胞濃度為1～5×106cells/ml，混合均勻，分裝

于已標示*之冷凍保存管中，1～2mlial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。