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一般提取DNA的原理基于這樣幾個步驟:1. 濃縮樣品(用詞不是很準(zhǔn)確),主要的意思就是通過離心、過濾等手段將樣品(比如土壤中的微生物、植物的根細胞等)收集到一起。2. 通過物理、化學(xué)或者兩者兼而有之的手段,破碎樣品,使目的DNA釋放出來。3. 將雜質(zhì)去除。4. 清洗DNA溶液。5. 離心沉淀DNA。
DNA試劑盒可以分為:小、中量全血基因組DNA試劑盒、組織基因組*、細胞基因組*、酵母基因組等這些不同種類的DNA試劑盒。
以提取土壤中樣品為例,簡要說一下。
1. 將土樣與緩沖液混合均勻,然后離心去上清,留下的沉淀再次沖洗(或者不沖洗),目的就是要初步去除土樣中的雜質(zhì)等。
2. 通過物理(比如超聲波、玻璃珠-振蕩、反復(fù)凍融)、或者化學(xué)(比如*、表面活性劑等)等方法來破碎細胞,使目的DNA釋放到溶液中。
3. 一般采用化學(xué)試劑,來去除溶液中的雜質(zhì)蛋白等物質(zhì),抽提DNA。可反復(fù)操作,使DNA更純(但是需要注意的是,抽提次數(shù)過多,會損失DNA,具體要看自己試驗的需要)
4. 使用醇類物質(zhì),低溫下沉淀DNA(一般是放在-20℃)
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