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酶在保存中的注意事項
酶的保存條件的選擇必須有利于維護酶天然結構的穩定性,保存酶應注意以下四點:
溫度
酶的保存溫度一般在0℃-4℃,但有些酶在低溫下反而容易失活,因為在低溫下亞基間的疏水作用減弱會引起酶的解離。此外,零度以下溶質的冰晶化還可引起鹽分濃縮,導致溶液的PH值發生改變,從而可能引起酶巰基間連接成為二巰鍵,損壞酶的活性中心,并使酶變性。
緩沖液
大多數酶在特定的PH值范圍內穩定,偏離了這個范圍便會失活,這個范圍因酶而異,如*在酸性條件下穩定,而固氮酶則在中性偏堿性條件下穩定。
氧防護
由于巰基等酶分子基團或Fe-S中心等容易為分子氧所氧化,故這類酶應加巰基保護劑或在氬氣或氮氣中保存。
蛋白質的濃度及純度
一般來說,酶的濃度越高,酶越穩定,制備成晶體或干粉更有利于保存。此外,還可通過加入酶的各種穩定劑如底物、輔酶、無機離子等加強酶穩定性,延長酶的保存時間。
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