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如何選擇正確的二抗 ?
二抗的選擇需要參照以下幾個(gè)方面,希望對(duì)廣大科研用于有所幫助!
【一抗的種屬來(lái)源】
二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源,例如:如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體,則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。艾美捷能為您提供zui全的抗不同種屬的*二抗,包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、人、豚鼠、豬、馬、牛、雞、鴨等二抗。
【一抗的類(lèi)別亞型】
二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類(lèi)免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類(lèi)別及亞類(lèi)通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中都會(huì)有描述,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(lèi)(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對(duì)這一亞類(lèi)的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類(lèi)/亞類(lèi)的情況下,可以選用抗相應(yīng)物種IgG。艾美捷能為您提供通用的IgG(H+L)二抗,或者特異性只結(jié)合IgM的AntiIgM(mu)Antibody、IgA的AntiIgA(alpha-Antibody、IgE的AntiIgE(epsilon)Antibody等。
【二抗的種屬來(lái)源】
一般來(lái)說(shuō),不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒(méi)有必然的,來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里,如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里,如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的,一個(gè)是小鼠來(lái)源的,則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時(shí)候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源的。艾美捷有相應(yīng)的驢來(lái)源的二抗,非常適合做類(lèi)似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。
【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】
一般來(lái)講,耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(tuán)(FITC、Rhodamine、TexasRed、PE、Rhodamine、Dylight等)、*、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于WesternBlot和ELISA,zui常用的二抗是酶標(biāo)二抗;而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(細(xì)胞免疫化學(xué),組織免疫化學(xué),流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào),可以使用Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中,則需要選擇不同的熒光標(biāo)記;而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。艾美捷能為您提供上述所有不同類(lèi)型標(biāo)記的二抗
【是否經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗】
為減少二抗與樣本的非特異性結(jié)合,艾美捷還能為您提供不同血清吸附的*二抗。如您的檢測(cè)樣本是人源的蛋白,一抗體是小鼠源的單克隆抗體,二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗,如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高,那我們向您推薦經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的抗小鼠源的二抗,這種二抗由于經(jīng)過(guò)人血清吸附而排除了與人源組織(如IgG等)可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG,因此將非特異性結(jié)合降低到zui低。
【Anti-IgG還是Anti-IgG,F(ab’)2fragment】
在一些如胸腺、脾臟、血液的組織以及造血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi),通常含有較多的Fc受體,這時(shí)候選擇二抗時(shí)選擇Anti-IgG,F(ab’)2fragment這樣的特異性二抗,這樣就消除了由于Fc部分與IgG的非特異性結(jié)合。常規(guī)的Anti-IgG(H+L)二抗與IgG的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng),即與IgG的Fc的F(ab’)2片段都能結(jié)合;由于IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域,因此Anti-IgG(H+L)與它們都有交叉反應(yīng)。而Anti-IgG,F(ab’)2fragment經(jīng)過(guò)了IgGFc片段的吸附,因此只與IgG的F(ab’)2片段結(jié)合,然而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域,因此與它們也有交叉反應(yīng)。
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