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測抗體的不同方法

時(shí)間:2012-11-7閱讀:340
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測抗體的不同方法

間接法測抗體

  間接法是檢測抗體zui常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:

  (1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

  (2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過程中被洗去。

  (3)加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對(duì)某種疾病的抗體,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

  (4)加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

  本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。 

 競爭法

  競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下:

  (1)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。

  (2)待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合,競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì),使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,保溫后,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充分的量。洗滌。  

    (3)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多,故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標(biāo)本中抗原含量越多。


 

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