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怎樣化凍動物細胞?
化凍過程的原則是要讓凍存的細胞快速融化。
如果細胞儲存在液氮液面下,使用者準備好必要的防護器具(至少要戴上護目鏡,戴上面罩和較厚的手套),防止進入凍存管的液氮驟然膨脹引起爆炸而造成傷害(筆者曾經在化凍的時候,為了防止污染,把冷凍管放到一個15ml離心管中,而且把蓋子擰上了,打算放到 37℃水浴,恰好回過頭去和別人談話,忽然聽到一聲爆炸聲,回頭一看,15ml的離心管就剩下蓋子了,其他的都爆飛了)。從冰箱或液氮罐取出細胞后將凍存管放 37℃水浴輕輕晃動使之化凍*,注意不要讓水浸到蓋子以防污染發生。
由于大多防凍劑與細胞長時間接觸時對細胞有毒害,所以盡快除去細胞凍存時加入的防凍劑。
防凍劑的去除方式和細胞的敏感性有關。有些細胞在某些防凍劑存在的條件下能很好的貼壁生長,可以直接將化凍的凍存細胞連同其凍存液加入預備好 15-20ml 培養液的細胞培養瓶或培養皿中,輕輕混勻后放入培養箱培養過夜后換培養液。
對于敏感細胞要加入 10ml 培養液中, 100xg 離心 5 分,去上清后加培養液輕輕重懸細胞,加入培養器皿后在培養箱培養,第二天更換培養液。
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