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316次平時在實驗室zui常聽到的一句話就是“今天某某試驗沒做好是為什么?今天某某試驗沒出結果是什么原因?今天某某試驗為什么會是這樣的呢?” 等等。然后仔細一查找原因,往往是由于操作上面的不認真,或是一些小小的細節(jié)沒有注意到。以下是集各路朋友的一些經驗,與大家分享:
1跑page膠的時候,小電壓跑會避免高電壓產生的熱量爾導致的膠層變形。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些,且分離效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分離。
2. 提取質粒的時候,zui后一步的酒精揮發(fā)很關鍵,基本上是其后續(xù)的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長一點時間,是空調吹熱風,或是37度溫箱放長一點的時間,我試過室溫過夜,酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的時候,大家往往會摸索一抗、二抗的濃度,封閉時間,曝光時間等等,而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠、轉膜,甚至重新提蛋白,這樣會浪費大量的時間。其實*沒有必要這樣。一次轉膜后,將PVDF膜晾干,裁減成小塊,保存起來,用的時候取出一塊,沒有任何影響。這對于摸索條件的戰(zhàn)友來說,節(jié)約了大量的時間。
4. 有關緩沖液和培養(yǎng)基配置
1)將緩沖液配方中的成分分別以10-100倍配成母液儲存,需要的時候只需將相應的母液混合,補加水稀釋即可
2)配培養(yǎng)基時通常會忘記各成分的量,如配LB時的三個成分不記得到底哪個是5g,哪個要10個,因此可以在常用的試劑瓶的標簽上注明所需的量,如配LB時,在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等,很方便,不需要每次配之前臨時翻書
還給大家推薦一個省質粒試劑盒硅膠柱與溶液的方法:
所有試劑使用手提質粒自己配置的溶液一、溶液二、溶液三(代替試劑盒的solution1、2、3),然后一比一的與飽和*或*(代替結合緩沖液)混合,就可以讓質粒在硅膠上結合,而試劑盒的硅膠柱可以重復使用,沒有試劑盒溶液量的限制,只要是一樣的質粒我想提幾管就提多少。
順便說一句硅膠柱也可以用自己買的硅膠粉末代替,離心后倒掉硅膠柱上面的上清就可以,用起來不象柱子方便。效果比手提的要好要快。
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