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恒溫消解在蛋白質測定中的應用
閱讀：8991發布時間：2009-7-16
恒溫消解在蛋白質測定中的應用
蘇敬武 叢偉紅 車燕妮
（威海市衛生防疫站 威海 264200）
本文摘自《中國食品衛生雜志》2001年第13卷第4期
凱氏定氮法測定蛋白質的含量，是zui常用的蛋白質測定方法，但樣品的消解費事費時，一般一臺電爐一天zui多消化兩個樣品。我們采用型恒溫消解儀進行蛋白質消解，4~6小時可同時消化16個樣品。
1 實驗方法
1.1 儀器及試劑
1.1.1 儀器
DTD-40型恒溫消解儀（北京中衛食品衛生科技公司出品）；平底硬質玻璃消化管；定氮蒸餾裝置。
1.1.2 試劑
硫酸銅；硫酸鉀；硫酸；過氧化氫；20g/L硼砂溶液；混合指示劑：2份1g/L甲基紅乙醇溶液與5份2g/L溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合；400g/LNaOH溶液；C（HCl）=0.02000mol/L的鹽酸標準滴定溶液。
1.2 實驗操作
1.2.1 樣品消解
稱0.2-2.0g固體樣品或5-10g液體樣品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀及20ml硫酸，稍搖勻后于管口放一小漏斗，置于恒溫消解儀中，300℃左右，小心加熱，一般2h內，管內容物可全部炭化，泡沫*停止。將溫度降至240℃左右，分幾次向管內共加10ml過氧化氫，提高溫度至390℃左右，繼續消化，至液體呈藍綠色澄清透明后，再繼續加熱30min，放冷后，定容100ml，混勻備用。取與處理樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸、過氧化氫按同一方法做試劑空白實驗。
本方法全部消化過程約需4-6h，一次zui多可消化16個樣品。
同時使用普通電爐進行蛋白質消解，進行比較實驗。
1.2.2 定氮測定
按國家標準[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白質的測定方法（4.3）微量定氮法進行操作。
2 結果及討論
2.1 樣品的用量：根據不同的蛋白質含量，取0.2g-2.0g樣品，置消化管內進行消解，在300℃初始消解無外溢現象。樣品先加酸放置過夜，可加快消解速度。開始消解時，由于消解溫度恒定，消解管整體受熱均勻，一般泡沫不能溢出管外，較直接電爐消解容易控制。
2.2 消解溫度：初始消解時溫度不可過低，過低造成消化時間延長。實驗證明初始消解溫度300℃為宜。只要消解管內無泡沫產生，應及時把溫度提高到390℃左右，以加快消解速度。
2.3 不同消解方法蛋白質測定結果的比較：對保健品、乳及乳制品等15份樣品，用凱氏燒瓶和恒溫消解儀消化樣品，分別測定蛋白質含量，結果比較如下：
表1 兩種消解方法蛋白質測定結果比較（%）
| 樣品號 | 普通電爐消解法 | 恒溫消解儀法 |
| 1 | 16.3 | 17.0 |
| 2 | 30.8 | 33.8 |
| 3 | 23.0 | 22.2 |
| 4 | 3.25 | 3.33 |
| 5 | 3.38 | 3.59 |
| 6 | 1.44 | 1.27 |
| 7 | 0.510 | 0.555 |
| 8 | 0.490 | 0.477 |
| 9 | 0.842 | 0.891 |
| 10 | 2.95 | 3.01 |
| 11 | 0.576 | 0.627 |
| 12 | 0.574 | 0.579 |
| 13 | 0.572 | 0.630 |
| 14 | 0.319 | 0.327 |
| 15 | 0.319 | 0.337 |
T=1.033; T[14,0.05）=2.145，P>0.05
兩種方法消化樣品，蛋白質含量測得結果經統計學處理表明無顯著差異。
參 考 文 獻
1 GB/T 5009-1996 食品衛生檢驗方法（理化部分）
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