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植物玉米素核苷(ZR)聯免疫分析(ELISA)
最近更新時間:2012-6-29
提 供 商:上海科研ELISA試劑盒專賣資料大小:13.1KB
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植物玉米素核苷(ZR)聯免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:植物玉米素核苷(ZR)聯免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定植物及相關樣本中玉米素核苷(ZR)含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中植物玉米素核苷(ZR)水平。用純化的植物玉米素核苷(ZR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的植物玉米素核苷(ZR)標準品和未知濃度的植物玉米素核苷(ZR)待檢樣品,溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物玉米素核苷(ZR)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物玉米素核苷(ZR)濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 9 | 標準品S1(6μg/L) | 0.5ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標準品S2(4μg/L) | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3(2μg/L ) | 0.5ml×1瓶 | |
4 | *標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標準品S4(1μg/L ) | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5(0.5μg/L ) | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1個 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3張 |
8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 12 | 說明書 | 1份 |
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于
操作步驟
1. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,
3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。
5. 加*標記的抗-IgG抗體:每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。
6. 洗滌:操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,
8. 洗滌:操作同4。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
線形范圍:
0.2μg/L -7μg/L
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2
2.有效期:6個月